缩略词表 | 第5-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
英文摘要 | 第9页 |
一 文献回顾 | 第12-27页 |
二 前言 | 第27-30页 |
三 实验材料 | 第30-35页 |
(一) 细胞系、质粒和菌种 | 第30-31页 |
(二) 主要试剂 | 第31-32页 |
(三) 主要溶液配制 | 第32-33页 |
(四) 主要仪器 | 第33-35页 |
四 实验方法 | 第35-44页 |
(一) RNA的提取和RT-PCR | 第35-36页 |
(二) 重组PCR | 第36-38页 |
(三) 真核表达载体的构建 | 第38页 |
(四) 细胞转染 | 第38-39页 |
(五) 克隆基因在培养HeLa细胞中的表达 | 第39-41页 |
(六) 细胞爬片制作和荧光显微镜观察 | 第41页 |
(七) 电镜标本制作 | 第41-42页 |
(八) 细胞核染色样品制备 | 第42页 |
(九) 细胞骨架染色样品制备 | 第42-43页 |
(十) MTT法测定细胞死亡率 | 第43页 |
(十一) 细胞计数 | 第43-44页 |
五 结果 | 第44-60页 |
(一) 人aspase-8催化结构域基因的扩增及鉴定 | 第44-46页 |
(二) 人caspase-8催化结构域基因的改建及其表达载体的构建 | 第46-48页 |
1 重构型人caspase-8基因的获取 | 第46-48页 |
2 真核表达载体的构建 | 第48页 |
(三) 重构型人caspase-8基因的表达促进HeLa细胞凋亡 | 第48-60页 |
1 重构型人caspase-8基因的表达 | 第48页 |
(1) Western blot | 第48-49页 |
(2) 间接免疫荧光 | 第49-50页 |
2 重构型人caspase-8基因的表达促进HeLa细胞凋亡 | 第50页 |
(1) 荧光显微镜观察 | 第50-54页 |
(2) 免疫组织化学染色 | 第54-56页 |
(3) 电镜观察细胞核改变 | 第56-57页 |
(4) 倒置显微镜观察 | 第57-58页 |
3 MTT法绘制细胞生长曲线 | 第58页 |
4 细胞计数 | 第58-60页 |
讨论 | 第60-64页 |
小结 | 第64-65页 |
致谢 | 第65-67页 |
参考文献 | 第67-72页 |
附录 | 第72页 |