| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第14-30页 |
| 1.1 α,β-不饱和醇的应用 | 第14-18页 |
| 1.1.1 脂肪族α,β-不饱和醇的应用 | 第15-16页 |
| 1.1.2 芳香族α,β-不饱和醇的应用 | 第16-17页 |
| 1.1.3 其他类α,β-不饱和醇的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 α,β-不饱和醇的制备 | 第18-21页 |
| 1.2.1 化学法制备α,β-不饱和醇 | 第18-20页 |
| 1.2.2 生物法制备α,β-不饱和醇 | 第20-21页 |
| 1.3 醇脱氢酶及其在α,β-不饱和醇的制备中的应用 | 第21-24页 |
| 1.3.1 醇脱氢酶的分类与结构特点 | 第21-23页 |
| 1.3.2 醇脱氢酶在α,β-不饱和醇的制备中的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 本论文研究背景、内容及意义 | 第24-26页 |
| 参考文献 | 第26-30页 |
| 第二章 约克氏菌WZY002及其在微生物催化制备α,β-不饱和醇中的应用 | 第30-51页 |
| 2.1 引言 | 第30-31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.2.1 菌种 | 第31页 |
| 2.2.2 培养基 | 第31页 |
| 2.2.3 缓冲液 | 第31页 |
| 2.2.4 试剂与材料 | 第31-32页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.3.0 菌种筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.1 菌种发酵培养 | 第33页 |
| 2.3.2 菌种鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3.2.1 镜检 | 第33-34页 |
| 2.3.2.2 分子鉴定 | 第34页 |
| 2.3.2.3 生理生化鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.3 α,β-不饱和醛、酮的位点选择性还原 | 第35-36页 |
| 2.3.3.1 辅底物对巴豆醛的位点选择性还原的影响 | 第35页 |
| 2.3.3.2 辅底物浓度对巴豆醛的位点选择性还原的影响 | 第35页 |
| 2.3.3.3 温度、pH对巴豆醛的位点选择性还原的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.4 气相色谱分析 | 第36页 |
| 2.3.5 气相-质谱联用分析 | 第36页 |
| 2.4 结果与分析 | 第36-47页 |
| 2.4.1 菌种鉴定结果 | 第36-41页 |
| 2.4.1.1 基本菌落特征 | 第36-37页 |
| 2.4.1.2 电镜下形态特征 | 第37页 |
| 2.4.1.3 生理生化鉴定 | 第37-39页 |
| 2.4.1.4 菌株WZY002分子鉴定 | 第39-41页 |
| 2.4.2 α,β-不饱和醛、酮位点选择性还原最适反应条件 | 第41-44页 |
| 2.4.2.1 辅底物对位点选择性还原反应的影响 | 第41-42页 |
| 2.4.2.2 辅底物浓度对位点选择性还原反应的影响 | 第42页 |
| 2.4.2.3 温度、pH对位点选择性还原反应的影响 | 第42-44页 |
| 2.4.3 α,β-不饱和醛、酮的位点选择性还原 | 第44-45页 |
| 2.4.4 芳香族不饱和醛、酮的还原 | 第45-46页 |
| 2.4.5 底物浓度对位点选择性还原的影响 | 第46-47页 |
| 2.5 本章小结与讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第三章 约克氏菌WZY002醇脱氢酶的纯化与表征 | 第51-72页 |
| 3.1 引言 | 第51-52页 |
| 3.2 实验材料 | 第52-54页 |
| 3.2.1 菌种 | 第52页 |
| 3.2.2 培养基 | 第52页 |
| 3.2.3 缓冲液 | 第52-53页 |
| 3.2.4 试剂与材料 | 第53页 |
| 3.2.5 主要仪器 | 第53-54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-58页 |
| 3.3.1 菌种培养 | 第54页 |
| 3.3.2 醇脱氢酶的分离 | 第54-56页 |
| 3.3.2.1 粗酶液的制备 | 第54-55页 |
| 3.3.2.2 离子交换柱层析 | 第55页 |
| 3.3.2.3 疏水柱层析 | 第55页 |
| 3.3.2.4 凝胶过滤层析 | 第55-56页 |
| 3.3.3 蛋白质浓度及酶活力测定 | 第56页 |
| 3.3.4 蛋白质分子量测定 | 第56页 |
| 3.3.5 醇脱氢酶的活性染色 | 第56-57页 |
| 3.3.6 蛋白质电转膜及N-端序列测定 | 第57页 |
| 3.3.7 醇脱氢酶酶学性质研究 | 第57-58页 |
| 3.3.7.1 酶促反应最适温度和pH | 第57页 |
| 3.3.7.2 醇脱氢酶的底物特异性 | 第57-58页 |
| 3.3.7.3 有机溶剂、金属离子及EDTA对醇脱氢酶活力影响 | 第58页 |
| 3.3.7.5 酶动力学参数 | 第58页 |
| 3.4 实验结果 | 第58-69页 |
| 3.4.1 醇脱氢酶的分离、纯化 | 第58-61页 |
| 3.4.2 醇脱氢酶的活性染色 | 第61-62页 |
| 3.4.3 醇脱氢酶电转膜及N-端序列测定 | 第62-63页 |
| 3.4.4 醇脱氢酶酶学性质研究 | 第63-69页 |
| 3.4.4.1 温度及pH对Yokenella sp.WZY002醇脱氢酶活力影响 | 第63-64页 |
| 3.4.4.2 金属离子及EDTA对Yokenella sp.WZY002醇脱氢酶活力影响 | 第64-66页 |
| 3.4.4.3 有机溶剂对Yokenella sp.WZY002醇脱氢酶活力影响 | 第66-67页 |
| 3.4.4.4 Yokenella sp.WZY002醇脱氢酶底物特异性 | 第67-68页 |
| 3.4.4.5 Yokenella sp.WZY002醇脱氢酶动力学参数 | 第68-69页 |
| 3.5 本章小结与讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-72页 |
| 第四章 约克氏菌WZY002醇脱氢酶克隆、表达及结构分析 | 第72-85页 |
| 4.1 引言 | 第72-73页 |
| 4.2 实验材料 | 第73-75页 |
| 4.2.1 菌种及质粒载体 | 第73页 |
| 4.2.3 缓冲液 | 第73页 |
| 4.2.4 试剂 | 第73-74页 |
| 4.2.5 主要仪器 | 第74-75页 |
| 4.3 实验方法 | 第75-77页 |
| 4.3.1 菌种培养 | 第75页 |
| 4.3.2 基因组及质粒组提取 | 第75页 |
| 4.3.3 引物设计 | 第75页 |
| 4.3.4 Yokenella sp.WZY002醇脱氢酶基因PCR扩增 | 第75-76页 |
| 4.3.5 目的基因链接及重组质粒转化 | 第76-77页 |
| 4.3.6 重组酶的诱导表达 | 第77页 |
| 4.3.7 重组Yokenella sp.WZY002醇脱氢酶的序列分析及同源建模 | 第77页 |
| 4.4 实验结果 | 第77-82页 |
| 4.4.1 基因组提取及目的基因PCR扩增 | 第77-79页 |
| 4.4.2 重组蛋白的诱导表达及活力测定 | 第79-80页 |
| 4.4.3 重组醇脱氢酶的结构分析 | 第80-82页 |
| 4.5 本章小结与讨论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 第五章 总结与展望 | 第85-88页 |
| 5.1 结论 | 第85-86页 |
| 5.2 展望 | 第86-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
