| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| ·几丁质（CHITIN） | 第13页 |
| ·几丁质酶的前体结构特征 | 第13页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第13-14页 |
| ·植物几丁质酶的进化模型 | 第14-15页 |
| ·几丁质酶的酶学特性 | 第15-16页 |
| ·几丁质酶的可诱导性 | 第16页 |
| ·几丁质酶基因的克隆及转化 | 第16页 |
| ·几丁质酶的生物功能 | 第16-19页 |
| ·抗真菌 | 第16-17页 |
| ·抗细菌（Escherchiacoli） | 第17-18页 |
| ·抗虫 | 第18-19页 |
| ·抗线虫（Meloidogyne）和螨类 | 第19页 |
| ·参与共生固氮 | 第19页 |
| ·参与发育调控 | 第19页 |
| ·其他方面作用 | 第19页 |
| ·几丁质酶的研究展望 | 第19-20页 |
| ·立题依据和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 紫花苜蓿几丁质酶CLASSⅠ基因CDNA 全长克隆及序列分析 | 第22-38页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·试验中用到的主要试剂的名称及其来源 | 第22页 |
| ·主要仪器的名称、生产厂家及其型号 | 第22-23页 |
| ·培养基配制 | 第23页 |
| ·引物设计、合成 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-28页 |
| ·总RNA 提取 | 第23-24页 |
| ·纯化RNA | 第24页 |
| ·PCR 扩增 | 第24-26页 |
| ·目的片段的回收 | 第26页 |
| ·目的片段与载体pMD18-T 的连接 | 第26页 |
| ·连接产物的验证 | 第26-27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第27页 |
| ·菌液PCR | 第27-28页 |
| ·生物信息学分析 | 第28页 |
| ·试验结果 | 第28-37页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-全长cDNA 的PCR 扩增 | 第28-30页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-连接、转化以及测序 | 第30-32页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-同源性分析 | 第32页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-一级结构预测 | 第32-33页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-二级结构预测 | 第33页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-三级结构预测 | 第33页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-跨膜信号分析 | 第33-34页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-亲/疏水性分析 | 第34页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-功能位点分析 | 第34-35页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-信号肽分析 | 第35-36页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-二硫键分析 | 第36页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-亚细胞定位分析 | 第36页 |
| ·紫花苜蓿MsChiⅠ-系统发育树构建 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 几丁质酶CLASSⅠ基因植物表达载体的构建 | 第38-49页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·试验中用到主要试剂的名称及其来源 | 第38页 |
| ·主要仪器的名称、生产厂家及其型号 | 第38页 |
| ·培养基配制 | 第38页 |
| ·溶液配制 | 第38-39页 |
| ·引物设计、合成 | 第39页 |
| ·试验方法 | 第39-45页 |
| ·植物表达载体构建的流程图 | 第39-40页 |
| ·引入酶切位点 | 第40-41页 |
| ·质粒的提取 | 第41-42页 |
| ·双酶切 | 第42页 |
| ·胶回收 | 第42-43页 |
| ·连接 | 第43页 |
| ·连接产物的验证 | 第43页 |
| ·连接产物的扩繁 | 第43-44页 |
| ·制备农杆菌感受态（LBA4404） | 第44页 |
| ·转化LBA4404 | 第44-45页 |
| ·挑取阳性单克隆，重新扩繁菌液，提取质粒，进行酶切和PCR 验证 | 第45页 |
| ·试验结果 | 第45-48页 |
| ·加酶切位点 | 第45页 |
| ·质粒提取 | 第45-46页 |
| ·双酶切鉴定 | 第46页 |
| ·目的条带胶回收 | 第46页 |
| ·目的基因和pCAMBIA1302 的连接、转化 | 第46-47页 |
| ·重组植物表达载体（MsChi-pCAMBIA1302）的验证 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·表达载体的选择 | 第48页 |
| ·加酶切位点的引物设计 | 第48页 |
| ·连接效率 | 第48-49页 |
| 第四章 农杆菌介导的几丁质酶CLASSⅠ基因转化烟草的研究 | 第49-56页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·试验中用到主要试剂的名称及其来源 | 第49页 |
| ·主要仪器的名称、生产厂家及其型号 | 第49页 |
| ·培养基配制 | 第49-50页 |
| ·溶液配制 | 第50页 |
| ·引物设计、合成 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-51页 |
| ·烟草无菌苗的获得 | 第50页 |
| ·烟草预培养 | 第50页 |
| ·侵染 | 第50-51页 |
| ·转基因烟草-分子鉴定 | 第51-53页 |
| ·转基因烟草-DNA 提取 | 第51页 |
| ·转基因烟草-PCR 检测 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草-RT-PCR 检测 | 第52-53页 |
| ·试验结果 | 第53-54页 |
| ·烟草的转化过程 | 第53页 |
| ·转基因烟草-PCR 检测 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草-RT-PCR 检测 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 几丁质酶CLASSⅠ基因原核表达载体的构建及表达 | 第56-64页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·试验中用到主要试剂的名称及其来源 | 第56页 |
| ·主要仪器的名称、生产厂家及其型号 | 第56页 |
| ·溶液配制 | 第56-57页 |
| ·SDS-PAGE 不连续体系凝胶配制 | 第57页 |
| ·引物设计、合成 | 第57页 |
| ·试验方法 | 第57-60页 |
| ·原核克隆体系 | 第57页 |
| ·转化（Tra1151-T1 感受态细胞） | 第57-58页 |
| ·阳性重组子的鉴定及测序 | 第58页 |
| ·提取质粒 | 第58页 |
| ·转化BL21(DE3) | 第58-59页 |
| ·IPTG 诱导表达 | 第59页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第59-60页 |
| ·试验结果 | 第60-62页 |
| ·原核表达载体的构建过程 | 第60-61页 |
| ·重组原核表达载体的验证 | 第61页 |
| ·质粒提取 | 第61页 |
| ·菌液PCR | 第61-62页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·表达载体和宿主菌株的选择 | 第62页 |
| ·关于信号肽 | 第62-63页 |
| ·IPTG 诱导 | 第63-64页 |
| 第六章 结论与展望 | 第64-65页 |
| ·主要结论 | 第64页 |
| ·后续工作展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73页 |
