| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩写词 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1.1 小麦条锈病 | 第15-18页 |
| 1.1.1 小麦条锈病的发生与危害 | 第15页 |
| 1.1.2 小麦抗条锈病基因的研究现状 | 第15-18页 |
| 1.2 植物抗病基因研究进展 | 第18-22页 |
| 1.2.1 植物的抗病性 | 第18-19页 |
| 1.2.2 植物抗病基因结构与功能 | 第19-20页 |
| 1.2.3 植物含F-box结构域类基因研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3 基因芯片技术及其在植物抗病性研究中的应用 | 第22-24页 |
| 1.3.1 基因芯片的概念及主要技术流程 | 第22页 |
| 1.3.2 基因芯片技术在植物抗病性研究中的应用 | 第22-24页 |
| 1.4 比较基因组学在小麦基因组学中的应用 | 第24-25页 |
| 1.5 VIGS技术及其在植物抗病性研究中的应用 | 第25-26页 |
| 1.6 本研究的目的意义和技术路线 | 第26-29页 |
| 1.6.1 目的意义 | 第26-27页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第27-29页 |
| 第二章 利用基因芯片筛选小麦抗条锈病基因Yr26的抗病相关基因 | 第29-49页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-31页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.2 方法 | 第30-31页 |
| 2.2.2.1 材料培养与接种 | 第30页 |
| 2.2.2.2 总RNA提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 基因芯片杂交 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-46页 |
| 2.3.1 抗感材料受条锈菌诱导前后差异表达基因的筛选和分析 | 第31-32页 |
| 2.3.2 条锈菌诱导12h,Y263和92R137(抗病材料)相对于扬麦158(感病材料)差异基因表达谱分析 | 第32-40页 |
| 2.3.2.1 条锈菌诱导12h,抗、感材料差异表达基因数目的分析 | 第32-34页 |
| 2.3.2.2 差异表达基因的基因本体论(gene ontology,GO)分类 | 第34-36页 |
| 2.3.2.3 差异表达基因的染色体电子定位及与二穗短柄草比较基因组学分析 | 第36-40页 |
| 2.3.3 条锈菌诱导36h,Y263和92R137相对于扬麦158差异基因表达谱分析 | 第40-46页 |
| 2.3.3.1 条锈菌诱导36h,抗、感材料差异表达基因数目的分析 | 第40-41页 |
| 2.3.3.2 差异表达基因的基因本体论(gene ontology,GO)分类 | 第41-43页 |
| 2.3.3.3 差异表达基因的染色体电子定位及与二穗短柄草比较基因组学分析 | 第43-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 小麦中一个含NB-ARC结构域基因TaRPM1的克隆及功能初步分析 | 第49-85页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 材料 | 第49-50页 |
| 3.3 实验方法 | 第50-69页 |
| 3.3.1 TaRPM1的克隆 | 第50-55页 |
| 3.3.1.1 5'RACE-3'RACE | 第50-53页 |
| 3.3.1.1.1 5'RACE反应 | 第50-52页 |
| 3.3.1.1.2 3'RACE反应 | 第52-53页 |
| 3.3.1.2 PCR产物的回收和克隆 | 第53-55页 |
| 3.3.1.2.1 PCR产物的回收纯化 | 第53页 |
| 3.3.1.2.2 PCR产物的连接 | 第53页 |
| 3.3.1.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第53-54页 |
| 3.3.1.2.4 连接产物的热击转化 | 第54页 |
| 3.3.1.2.5 阳性克隆的鉴定 | 第54页 |
| 3.3.1.2.6 cDNA及gDNA全长序列的扩增 | 第54-55页 |
| 3.3.2 TaRPMl表达特征分析 | 第55-56页 |
| 3.3.2.1 总RNA的提取及其纯度检测 | 第55页 |
| 3.3.2.2 cDNA第一链浓度调整 | 第55-56页 |
| 3.3.2.3 半定量RT-PCR表达分析 | 第56页 |
| 3.3.3 TaRPMl染色体定位分析 | 第56-59页 |
| 3.3.4 TaRPM1 VIGS功能分析 | 第59-64页 |
| 3.3.4.1 VIGS载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.3.4.1.1 VIGS引物设计 | 第59页 |
| 3.3.4.1.2 重组γ载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.3.4.2 VIGS载体的线性化 | 第60-61页 |
| 3.3.4.3 体外转录 | 第61-62页 |
| 3.3.4.4 培养和接种 | 第62-63页 |
| 3.3.4.4.1 小麦和菌种的培养 | 第62页 |
| 3.3.4.4.2 病毒载体的摩擦接种参照 | 第62页 |
| 3.3.4.4.3 条锈菌接种 | 第62-63页 |
| 3.3.4.5 取样 | 第63页 |
| 3.3.4.6 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第63-64页 |
| 3.3.4.7 条锈菌侵染过程组织学观察 | 第64页 |
| 3.3.5 TaRPM1转基因功能分析 | 第64-68页 |
| 3.3.5.1 受体材料准备 | 第64页 |
| 3.3.5.2 培养基配置 | 第64-65页 |
| 3.3.5.3 表达载体的构建及转化 | 第65-66页 |
| 3.3.5.4 微弹制备及基因枪轰击 | 第66-67页 |
| 3.3.5.4.1 质粒DNA的提取 | 第66页 |
| 3.3.5.4.2 微弹制备 | 第66页 |
| 3.3.5.4.3 轰击转化 | 第66-67页 |
| 3.3.5.4.4 抗性愈伤组织的筛选及植株再生 | 第67页 |
| 3.3.5.5 转基因植株的分子鉴定 | 第67-68页 |
| 3.3.5.5.1 CTAB法提取再生植株的基因组DNA | 第67页 |
| 3.3.5.5.2 再生植株的PCR检测 | 第67-68页 |
| 3.3.5.6 转基因植株的条锈病抗性鉴定 | 第68页 |
| 3.3.6 候选基因的生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 3.4 结果与分析 | 第69-83页 |
| 3.4.1 总RNA样品的质量检测 | 第69页 |
| 3.4.2 TaRPM1基因的克隆和特征分析 | 第69-75页 |
| 3.4.2.1 92R137中TaRPM1基因的克隆及序列结构分析 | 第69-72页 |
| 3.4.2.2 TaRPM1染色体定位分析 | 第72-73页 |
| 3.4.2.3 TaRPM1表达特征分析 | 第73-74页 |
| 3.4.2.4 TaRPM1多序列比对及进化树的构建 | 第74-75页 |
| 3.4.3 TaRPM1 VIGS功能分析 | 第75-80页 |
| 3.4.3.1 BSMV-VIGS载体构建 | 第75-76页 |
| 3.4.3.2 重组病毒的线性化和体外转录 | 第76页 |
| 3.4.3.3 接种病毒后表现及qRT-PCR对目标基因的沉默效率分析 | 第76-78页 |
| 3.4.3.4 接种条锈菌后的表型观察 | 第78-79页 |
| 3.4.3.5 接种条锈菌后的组织学观察 | 第79-80页 |
| 3.4.4 TaRPM1转基因功能分析 | 第80-83页 |
| 3.4.4.1 TaRPM1表达载体构建 | 第80页 |
| 3.4.4.2 TaRPM1转基因植株的获得 | 第80-81页 |
| 3.4.4.3 TaRPM1转基因植株的条锈病抗性鉴定 | 第81-83页 |
| 3.4.4.3.1 苗期条锈病抗性鉴定 | 第81-83页 |
| 3.4.4.3.2 成株期条锈病抗性鉴定 | 第83页 |
| 3.4.4.4 TaRPM1转基因植株T_1代目标基因的转录水平检测 | 第83页 |
| 3.5 讨论 | 第83-85页 |
| 第四章 小麦中一个含F-box蛋白基因TaFBK的克隆及功能初步分析 | 第85-107页 |
| 4.1 引言 | 第85页 |
| 4.2 材料 | 第85页 |
| 4.3 实验方法 | 第85-87页 |
| 4.3.1 TaFBK的电子克隆 | 第85-86页 |
| 4.3.2 TaFBK-B转基因表达载体的构建 | 第86-87页 |
| 4.4 结果与分析 | 第87-104页 |
| 4.4.2 TaFBK基因的克隆和特征分析 | 第87-94页 |
| 4.4.2.2 92R137中TaFBK基因的克隆及序列结构分析 | 第87-89页 |
| 4.4.2.3 TaFBK表达特征分析 | 第89-90页 |
| 4.4.2.4 抗、感小麦材料中TaFBK同源基因的克隆及TaFBK拷贝数分析 | 第90-93页 |
| 4.4.2.5 TaFBK多序列比对及进化树的构建 | 第93-94页 |
| 4.4.3 TaFBK的VIGS功能分析 | 第94-98页 |
| 4.4.3.1 BSMV-VIGS载体构建 | 第94-95页 |
| 4.4.3.2 重组病毒的线性化和体外转录 | 第95-96页 |
| 4.4.3.3 对TaFBK沉默效率的qRT-PCR分析 | 第96页 |
| 4.4.3.4 接种条锈菌后的表型观察 | 第96-97页 |
| 4.4.3.5 接种条锈菌后的组织学观察 | 第97-98页 |
| 4.4.4 TaFBK转基因功能分析 | 第98-104页 |
| 4.4.4.1 TaFBK-D转基因表达载体构建 | 第98-99页 |
| 4.4.4.2 TaFBK-D转基因植株的获得 | 第99页 |
| 4.4.4.3 TaFBK-D转基因植株的条锈病抗性鉴定 | 第99-103页 |
| 4.4.4.3.1 苗期条锈病抗性鉴定 | 第100-101页 |
| 4.4.4.3.2 成株期条锈病抗性鉴定 | 第101-103页 |
| 4.4.4.5 TaFBK-B转基因表达载体构建 | 第103-104页 |
| 4.4.4.6 TaFBK-B转基因植株的获得 | 第104页 |
| 4.5 讨论 | 第104-107页 |
| 全文结论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-121页 |
| 附录 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
