| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 我国天然橡胶生产的现状 | 第11页 |
| 1.2 巴西橡胶树生物学研究概况 | 第11-14页 |
| 1.2.1 巴西橡胶树的产排胶机制研究现状 | 第11-13页 |
| 1.2.2 胶乳再生调控机制的分子生物学研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 GTP结合蛋白的概述 | 第14-15页 |
| 1.4 小G蛋白 | 第15-23页 |
| 1.4.1 小G蛋白的种类 | 第15-16页 |
| 1.4.2 小G蛋白的结构及调节机制 | 第16-18页 |
| 1.4.2.1 小G蛋白的结构 | 第17页 |
| 1.4.2.2 小G蛋白的调节机制 | 第17-18页 |
| 1.4.3 Rop蛋白家族及其在植物中的研究概况 | 第18-23页 |
| 1.4.3.1 Rop蛋白的系统进化分析 | 第18-19页 |
| 1.4.3.2 RoP蛋白的结构 | 第19页 |
| 1.4.3.3 Rop蛋白的分类 | 第19-20页 |
| 1.4.3.4 RoP蛋白的信号转导 | 第20-21页 |
| 1.4.3.5 Rop蛋白在植物中的功能 | 第21-23页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.6 本研究的技术路线 | 第24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-50页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 质粒及菌种 | 第24页 |
| 2.1.3 生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法和步骤 | 第25-50页 |
| 2.2.1 橡胶树Rop小G蛋白基因的克隆 | 第25-32页 |
| 2.2.1.1 橡胶树RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 胶乳总RNA的质量检测 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 胶乳RNA中DNA的消化 | 第27页 |
| 2.2.1.4 半定量RT-PCR调整胶乳总RNA用量 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 逆转录合成cDNA第一链 | 第28页 |
| 2.2.1.6 Rop小G蛋白基因保守片段获取 | 第28页 |
| 2.2.1.7 Rop小G蛋白基因3’RACE扩增 | 第28-32页 |
| 2.2.1.8 Rop小G蛋白基因cDNA全长扩增 | 第32页 |
| 2.2.2 Rop小G蛋白基因组全长的克隆 | 第32-34页 |
| 2.2.3 HbRop1,2,3,4,5基因启动子的全长扩增 | 第34-36页 |
| 2.2.4 橡胶树小G蛋白基因的半定量和实时荧光定量PCR表达分析 | 第36-40页 |
| 2.2.5 原核表达 | 第40-44页 |
| 2.2.5.1 HbRop1,2,3,4基因的原核表达 | 第40-42页 |
| 2.2.5.2 HbRop5基因的原核表达 | 第42-44页 |
| 2.2.6 HbRop5原核表达目的蛋白的分离和纯化 | 第44页 |
| 2.2.7 Western blot检测分离纯化的HbRop5原核表达目的蛋白 | 第44页 |
| 2.2.8 橡胶树叶片与嫩茎组织中HbRop3与HbRop5的mRNA原位杂交分析 | 第44-50页 |
| 2.2.8.1 材料处理与包埋 | 第44-45页 |
| 2.2.8.2 制片 | 第45页 |
| 2.2.8.3 制备探针 | 第45-47页 |
| 2.2.8.4 预杂交 | 第47-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-78页 |
| 3.1 橡胶树不同组织RNA的提取及检测 | 第50页 |
| 3.2 橡胶树叶片DNA的提取及检测 | 第50页 |
| 3.3 HbRop基因全长cDNA的克隆及序列分析 | 第50-56页 |
| 3.3.1 HbRop基因保守区获取 | 第50页 |
| 3.3.2 HbRop5基因3’端序列的扩增 | 第50-51页 |
| 3.3.3 HbRop1,2,3,4,5基因全长序列的扩增 | 第51-52页 |
| 3.3.4 HbRop基因的生物信息学分析 | 第52-56页 |
| 3.4 HbRop基因的基因组克隆及序列分析 | 第56-59页 |
| 3.4.1 HbRoP基因组全长扩增结果 | 第56-57页 |
| 3.4.2 HbRoP基因结构分析 | 第57-59页 |
| 3.5 HbRop基因启动子克隆与序列分析 | 第59-64页 |
| 3.5.1 HbRop5基因启动子部分序列克隆 | 第59-60页 |
| 3.5.2 HbRop1,2,3,4,5基因启动子序列克隆 | 第60页 |
| 3.5.3 HbRop基因启动子序列的生物信息学分析 | 第60-64页 |
| 3.5.3.1 核心启动子及转录起始位点预测 | 第60-61页 |
| 3.5.3.2 启动子同源性分析 | 第61-62页 |
| 3.5.3.3 启动子GC含量分析 | 第62-63页 |
| 3.5.3.4 启动子顺式作用元件的分析 | 第63-64页 |
| 3.6 HbRop基因的表达分析 | 第64-70页 |
| 3.6.1 HbRop基因的组织表达分析 | 第64-65页 |
| 3.6.2 割胶对HbRop基因表达的影响 | 第65-66页 |
| 3.6.3 伤害对HbRoP基因表达的影响 | 第66-67页 |
| 3.6.4 健康树和不同程度死皮树(TPD)中HbRop基因表达的差异 | 第67-68页 |
| 3.6.5 激素刺激对HbRoP基因表达的影响 | 第68-70页 |
| 3.6.6 HbRop基因在橡胶树热研-879品系一年生枝条刮伤处理树皮中的表达分析 | 第70页 |
| 3.7 HbRop基因的原核表达 | 第70-76页 |
| 3.7.1 原核表达载体的构建与鉴定 | 第70-72页 |
| 3.7.1.1 HbRop1,2,3,4原核表达载体的构建与鉴定 | 第70-71页 |
| 3.7.1.2 HbRop5原核表达载体的构建与鉴定 | 第71-72页 |
| 3.7.2 目的蛋白的表达 | 第72-76页 |
| 3.7.2.1 HbRop1,2,3,4基因的原核表达 | 第72-73页 |
| 3.7.2.2 HbRop5基因的原核表达 | 第73-76页 |
| 3.8 橡胶树中HbRop3与HbRop5的mRNA原位杂交 | 第76-78页 |
| 3.8.1 mRNA原位杂交探针的制备 | 第76页 |
| 3.8.2 橡胶树叶片HbRop3与HbRop5的mRNA原位杂交 | 第76-77页 |
| 3.8.3 橡胶树嫩茎中HbRop3与HbRop5的mRNA原位杂交 | 第77-78页 |
| 4 结论与讨论 | 第78-81页 |
| 4.1 讨论 | 第78-80页 |
| 4.1.1 材料的选取 | 第78页 |
| 4.1.2 基因表达水平的检测 | 第78页 |
| 4.1.3 基因的表达分析 | 第78-79页 |
| 4.1.4 基因的可能功能分析 | 第79-80页 |
| 4.1.5 基因的进一步研究 | 第80页 |
| 4.2 结论 | 第80-81页 |
| 附：橡胶树两个Ran小G蛋白基因的克隆与表达分析 | 第81-92页 |
| 前言 | 第82页 |
| 1 材料与方法 | 第82-84页 |
| 1.1 材料 | 第82-83页 |
| 1.2 引物 | 第83-84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-90页 |
| 2.1 橡胶树中两个Ran小G蛋白基因cDNA全长的克隆和序列分析 | 第84页 |
| 2.2 橡胶树HbRan基因的生物信息学分析 | 第84-87页 |
| 2.3 橡胶树HbRan基因的表达模式分析 | 第87-90页 |
| 3 小结 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 附录 | 第101-106页 |
| 附录一：有关试剂的配制 | 第101-105页 |
| 附录二：缩略词 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第107页 |
