| 摘要 | 第16-20页 |
| Abstract | 第20-26页 |
| Introduction | 第27-29页 |
| PART Ⅰ: REVIEW OF LITERATURE | 第29-49页 |
| CHAPTER 1:Review of literature | 第29-49页 |
| 1 Life cycle of Haemonchus contortus | 第29-31页 |
| 2 Pathogenesis | 第31页 |
| 3 Importance | 第31-32页 |
| 4 Excretory and secretory Products (ESPs) | 第32-34页 |
| 5 Immunity against helminths | 第34-37页 |
| References | 第37-49页 |
| PART Ⅱ: RESEARCH WORK | 第49-265页 |
| CHAPTER 2: Effects of the Haemonchus contortus excretory and secretory proteins(HcESPs) on the functions of goat peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in vitro | 第49-79页 |
| 1. Introduction | 第50-52页 |
| 2. Material and Methods | 第52-58页 |
| 2.1. Chemical and reagents | 第52页 |
| 2.2. Collection of adult H. contortus worms and in vitro production of H. contortusexcretory and secretory product (HcESP) | 第52-53页 |
| 2.3. Production polyclonal IgG against HcESP (IgG_(HcESP)) | 第53-54页 |
| 2.4. Western blot analysis | 第54页 |
| 2.5. Isolation of goat PBMCs and Confirmation of HcESP binding to PBMCs | 第54-55页 |
| 2.6. Impact of the HcESP on the cytokine production by goat PBMCs in vitro Detection ofthe cytokine levels by ELISA | 第55-56页 |
| 2.7. Cell migration assay | 第56-57页 |
| 2.8. Cell proliferation assay | 第57页 |
| 2.9. Nitric oxide production Assay | 第57-58页 |
| 2.10. Apoptosis | 第58页 |
| 3. Results | 第58-66页 |
| 3.1 SDS-PAGE page analysis of HcESP | 第58-59页 |
| 3.2 Immunofluorescence Assay (IFA) for the confirmation of HcESP binding to goatPBMCs | 第59-61页 |
| 3.3 Effects of the HcESP on the production of cytokines | 第61-62页 |
| 3.4 Cell migration assay | 第62-63页 |
| 3.5 Nitric oxide (NO) production | 第63-64页 |
| 3.6 Cell proliferation | 第64-65页 |
| 3.7 cell apoptosis | 第65-66页 |
| 4. Discussion | 第66-70页 |
| Reference | 第70-79页 |
| CHAPTER 3: Proteomic analysis of Haemonchus contortus excretory and secretoryproteins (HcESPs) binding to goat peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in vitro | 第79-109页 |
| 1. Introduction | 第80-83页 |
| 2. Material and Methods | 第83-86页 |
| 2.1 Chemical and reagents | 第83-84页 |
| 2.2 Co- Immunoprecipitation (Co-IP) | 第84页 |
| 2.3 In- Solution trypsin digestion and Liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS) | 第84-85页 |
| 2.4 Database search | 第85-86页 |
| 2.5 Gene Ontology (GO) | 第86页 |
| 3. Results | 第86-97页 |
| 3.1 In vitro Identification of interacting protein of HcESP | 第86-94页 |
| 3.2 Gene Ontology analysis | 第94-97页 |
| 4. Discussions | 第97-100页 |
| Reference | 第100-109页 |
| Chapter 4: Proteomic analysis of the excretory and secretory proteins of Haemonchuscontortus (HcESP) binding to goat PBMCs in vivo at different developmental stages of theworm | 第109-163页 |
| 1. Introduction | 第111-113页 |
| 2. Materials and Methods | 第113-115页 |
| 2.1 Experimentally infection of H. contortus | 第113-114页 |
| 2.2 Collection of PBMCs from goats experimentally infected with H. contortus | 第114页 |
| 2.3 Functional annotation improvement by string protein clustering analysis | 第114-115页 |
| 3. Results | 第115-142页 |
| 3.1 Confirmation of the binding of HcESPs to goat PBMCs in vivo | 第115-116页 |
| 3.2 Analysis of HcESP binding proteins in vivo by LC-MS/MS | 第116-131页 |
| 3.3 Gene Ontology (GO) analysis | 第131-136页 |
| 3.4 Improvement of functional annotation by protein clustering | 第136-142页 |
| 4. Discussion | 第142-150页 |
| References | 第150-163页 |
| Chapter 5: Molecular cloning, expression and regulatory effects of recombinant proteinof 14-3-3 isoform 2 (rHcftt-2) on the goat PBMCs functions | 第163-209页 |
| 1. Introduction | 第164-166页 |
| 2. Materials and methods | 第166-178页 |
| 2.1 Vectors, Bacterial stains and reagents | 第166-167页 |
| 2.2 Equipments | 第167页 |
| 2.3 Parasites | 第167页 |
| 2.4 Construction of Haemonchus contortus cDNA | 第167-168页 |
| 2.4.1 Total RNA extraction | 第167-168页 |
| 2.4.2 cDNA construction | 第168页 |
| 2.5 Amplification of Hcftt-2 DNA fragment | 第168-170页 |
| 2.6 Cloning of of Hcl4-3-3 into T-vector | 第170-172页 |
| 2.6.1 Transformation of Hc14-3-3 into DH5a | 第170-171页 |
| 2.6.2 Plasmid extraction identification | 第171-172页 |
| 2.6.3 Identification of the recombinant plasmid pMD-19T/Hcftt-2 | 第172页 |
| 2.7 Construction of prokaryotic expression plasmid pET32/Hcftt-2 | 第172-173页 |
| 2.8 Expression and purification of recombinant | 第173-174页 |
| 2.9 Generation of polyclonal antibodies | 第174页 |
| 2.10 Immuno-blot for the rHcftt-2 | 第174-175页 |
| 2.11 Sequence alignments and phylogenetic analysis | 第175页 |
| 2.12 Prediction of B and T cell epitopes | 第175页 |
| 2.13 Binding of rHcftt-2 to goat PBMC | 第175-176页 |
| 2.14 Detection of the cytokine levels by ELISA | 第176页 |
| 2.15 Cell migration assay | 第176-177页 |
| 2.16 Cell proliferation assay | 第177页 |
| 2.17 Nitric oxide production Assay | 第177-178页 |
| 2.18 Apoptosis | 第178页 |
| 3. Results | 第178-193页 |
| 3.1 Cloning of Hcftt-2gene | 第178-179页 |
| 3.2 Construction and identification of the recombinant pET-32a (+)-Hcftt-2 | 第179-180页 |
| 3.3 Sequence analysis | 第180-183页 |
| 3.4 Phylogenetic analysis | 第183-184页 |
| 3.5 Prediction of B and T cell epitopes | 第184-185页 |
| 3.6 Expression and purification of rHcftt-2 | 第185-186页 |
| 3.7 Detection of recombinant Hcftt-2 protein by western blotting | 第186-187页 |
| 3.8 Binding of rHcftt-2 to goat PBMCs | 第187-188页 |
| 3.9 Detection of the cytokine levels by ELISA | 第188-189页 |
| 3.10 Cell migration assay | 第189-190页 |
| 3.11 Cell proliferation assay | 第190-191页 |
| 3.12 Nitric oxide production Assay | 第191-192页 |
| 3.13 Apoptosis | 第192-193页 |
| 4. Discussion | 第193-198页 |
| References | 第198-209页 |
| Chapter 6:Molecular Cloning, Expression and effects on the goat PBMCs functions ofsmall GTPase ADP-ribosylation factor gene (HcARF1) | 第209-237页 |
| 1. Introduction | 第210-211页 |
| 2. Materials and methods | 第211-212页 |
| 3. Results | 第212-227页 |
| 3.1 Cloning of HcARF1 gene | 第212-213页 |
| 3.2 Sequence and phylogenetic analysis | 第213-218页 |
| 3.3 Prediction of B and T Cell epitopes | 第218-219页 |
| 3.4 Expression and purification of rHcARFl | 第219页 |
| 3.5 Detection of recombinant HcARF1protein by western blotting | 第219-220页 |
| 3.6 Binding of rHcARFlto PBMC | 第220-221页 |
| 3.7 Detection of the cytokine levels by ELISA | 第221-223页 |
| 3.8 Cell migration assay | 第223-224页 |
| 3.9 Cell proliferation assay | 第224-225页 |
| 3.10 Nitric oxide production Assay | 第225-226页 |
| 3.11 Apoptosis | 第226-227页 |
| 4. Discussion | 第227-229页 |
| References | 第229-237页 |
| Chapter 7: Molecular Cloning, Expression and effects on the goat PBMCs functionscysteine-rich secretory proteins, antigen 5, and pathogenesis-related 1 protein (Hc-24) | 第237-265页 |
| 1. Introduction | 第238-239页 |
| 2. Materials and methods | 第239-240页 |
| 3. Results | 第240-254页 |
| 3.1 Cloning of Hc-24 gene | 第240-241页 |
| 3.2 Construction and identification of the recombinant pET-32a (+)-Hc-24 | 第241-242页 |
| 3.3 Sequence and Phylogenetic analysis of Hc-24 | 第242-245页 |
| 3.5 Prediction of B and T cell epitopes | 第245-246页 |
| 3.6 Expression and purification of rHc-24 | 第246页 |
| 3.7 Detection of recombinant Hc-24 protein by western blotting | 第246-247页 |
| 3.8 Binding of rHc-24 to goat PBMCs | 第247-248页 |
| 3.9 Detection of the cytokine levels by ELISA | 第248-250页 |
| 3.10 Cell migration assay | 第250-251页 |
| 3.11 Cell proliferation assay | 第251-252页 |
| 3.12 Nitric oxide production Assay | 第252-253页 |
| 3.13 Apoptosis | 第253-254页 |
| 4. Discussion | 第254-258页 |
| References | 第258-265页 |
| Publications | 第265-267页 |
| Acknowledgement | 第267-269页 |
| Dedication | 第269页 |
