摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-12页 |
文献综述 | 第12-21页 |
第一章 禽脑脊髓炎病毒分子生物学特性及检测方法的研究进展 | 第12-21页 |
·病原学 | 第12-13页 |
·病毒的形态特征 | 第12-13页 |
·病毒的增殖培养 | 第13页 |
·AEV 的分子生物学 | 第13-16页 |
·AEV 基因组 | 第13-14页 |
·主要的蛋白及功能 | 第14-16页 |
·禽脑脊髓炎病毒的检测方法 | 第16-20页 |
·病原的分离 | 第17页 |
·琼脂扩散试验(AGP) | 第17页 |
·荧光抗体技术(FA) | 第17-18页 |
·病毒中和试验(VN) | 第18页 |
·鸡胚易感性试验(ES) | 第18页 |
·单克隆抗体技术(MAb) | 第18页 |
·反转录聚合酶链反应(RT-PCR) | 第18-19页 |
·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第19-20页 |
·小结 | 第20-21页 |
试验研究 | 第21-53页 |
第二章 禽脑脊髓炎病毒陕西分离株 VP1 基因的克隆及序列分析 | 第21-32页 |
·材料 | 第21-22页 |
·AE 毒株 | 第21页 |
·AE 病料 | 第21页 |
·SPF 鸡胚 | 第21页 |
·载体与菌株 | 第21页 |
·酶及试剂 | 第21-22页 |
·AEV 的引物 | 第22页 |
·AEV VP1 基因参考毒株 | 第22页 |
·培养基及常用试剂的配制 | 第22页 |
·主要仪器 | 第22页 |
·方法 | 第22-25页 |
·AEV YL 株的分离鉴定 | 第22-23页 |
·人工感染实验 | 第23页 |
·病毒的增殖 | 第23页 |
·AEV SX 株和 YL 株 RNA 的提取 | 第23页 |
·RT-PCR 扩增 | 第23-24页 |
·纯化 PCR 产物 | 第24页 |
·产物的连接 | 第24页 |
·产物的转化 | 第24-25页 |
·重组质粒 pMD18-T-VP1 的提取 | 第25页 |
·重组质粒 pMD18-T-VP1 酶切鉴定 | 第25页 |
·AEV VP1 序列测定及分析 | 第25页 |
·预测分析 VP1 编码蛋白的一级结构和抗原表位 | 第25页 |
·结果 | 第25-30页 |
·AEV YL 株的分离鉴定 | 第25页 |
·人工感染试验 | 第25-26页 |
·AEV VP1 基因的扩增 | 第26页 |
·阳性克隆的鉴定 | 第26-27页 |
·AEV VP1 基因的核苷酸序列测定 | 第27页 |
·AEV VP1 基因的同源性分析 | 第27-28页 |
·AEV VP1 基因进化分析 | 第28页 |
·AEV VP1 蛋白的抗原表位预测 | 第28-30页 |
·讨论 | 第30-31页 |
·小结 | 第31-32页 |
第三章 禽脑脊髓炎病毒陕西分离株 SX VP1 基因的原核表达 | 第32-44页 |
·材料 | 第32-33页 |
·质粒、载体和菌株 | 第32页 |
·主要试剂 | 第32页 |
·血清及酶标抗体 | 第32页 |
·常用缓冲液配制 | 第32-33页 |
·主要仪器设备 | 第33页 |
·方法 | 第33-38页 |
·原核表达载体 pET32a-VP1 的构建 | 第33-35页 |
·重组质粒 pET32a-VP1 的诱导表达 | 第35-36页 |
·表达产物的检测 | 第36-37页 |
·重组蛋白的制备纯化 | 第37-38页 |
·结果 | 第38-42页 |
·重组质粒的构建及鉴定 | 第38-39页 |
·重组质粒 pET32a-VP1 的诱导表达 | 第39-41页 |
·Western blot 检测结果 | 第41页 |
·重组蛋白的纯化结果 | 第41-42页 |
·讨论 | 第42-43页 |
·小结 | 第43-44页 |
第四章 AEV 重组 VP1 蛋白间接 ELISA 方法的建立 | 第44-53页 |
·材料 | 第44-45页 |
·抗原 | 第44页 |
·血清 | 第44页 |
·试剂 | 第44页 |
·ELISA 所用试剂的配制 | 第44-45页 |
·主要仪器 | 第45页 |
·方法 | 第45-47页 |
·间接 ELISA 方法的标准化 | 第45-46页 |
·间接 ELISA 检测方法性能评价 | 第46页 |
·临床样品检测 | 第46-47页 |
·结果 | 第47-51页 |
·ELISA 方法的标准化 | 第47-50页 |
·间接 ELISA 检测方法性能评价的结果 | 第50-51页 |
·临床样品检测结果 | 第51页 |
·讨论 | 第51-52页 |
·小结 | 第52-53页 |
结论 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-61页 |
缩略词表 | 第61-62页 |
致谢 | 第62-63页 |
作者简介 | 第63页 |