| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-32页 |
| 1.1 微生物油脂简介 | 第20页 |
| 1.2 微生物生产油脂脂肪酸代谢途径研究 | 第20-22页 |
| 1.3 微生物生产油脂研究 | 第22-25页 |
| 1.3.1 粘红酵母生产油脂现状 | 第22-23页 |
| 1.3.2 大肠杆菌生产油脂研究 | 第23-25页 |
| 1.4 微生物体内脂肪酸的提取与检测方法 | 第25-26页 |
| 1.4.1 微生物体内脂肪酸的提取 | 第25页 |
| 1.4.2 微生物体内脂肪酸的检测方法 | 第25-26页 |
| 1.5 该论文研究目的 | 第26页 |
| 1.6 该论文研究思路 | 第26-32页 |
| 第二章 粘红酵母分子生物学初步探究与高产油脂菌株的选育 | 第32-62页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 实验工具与试剂 | 第32-35页 |
| 2.2.1 菌株,载体和合成引物 | 第32-33页 |
| 2.2.2 培养基 | 第33-34页 |
| 2.2.3 试剂和仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-42页 |
| 2.3.1 粘红酵母基因组提取 | 第35页 |
| 2.3.2 粘红酵母菌株鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.3 粘红酵母尿嘧啶缺陷型菌株筛选及zeocin抗性敏感性验证 | 第36页 |
| 2.3.4 粘红酵母油脂代谢过程关键酶基因的获得 | 第36-38页 |
| 2.3.5 粘红酵母高通量筛选方法的建立 | 第38-42页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第42-59页 |
| 2.4.1 粘红酵母基因组提取 | 第42-43页 |
| 2.4.2 粘红酵母菌株鉴定 | 第43-45页 |
| 2.4.3 粘红酵母尿嘧啶缺陷型菌株筛选及Zeocin抗性敏感性验证 | 第45-47页 |
| 2.4.4 粘红酵母油脂代谢过程关键酶基因的获得 | 第47-51页 |
| 2.4.5 粘红酵母高通量筛选方法的建立 | 第51-59页 |
| 2.5 小结 | 第59-62页 |
| 第三章 大肠杆菌油脂基因工程菌构建 | 第62-100页 |
| 3.1 引言 | 第62-63页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第63-65页 |
| 3.2.1 菌株,质粒载体和合成引物 | 第63-65页 |
| 3.2.2 培养基与试剂、仪器 | 第65页 |
| 3.3 实验步骤与方法 | 第65-82页 |
| 3.3.1 pETDuet-1-tesA’-fabD载体的构建 | 第66-70页 |
| 3.3.2 pACYCDuet-1-aceE-aceF载体的构建 | 第70-74页 |
| 3.3.3 pETDuet-1-ACS-FadR载体的构建 | 第74-79页 |
| 3.3.4 pETDuet-1-tesA’-fabD-ACS-FadR载体的构建 | 第79-81页 |
| 3.3.5 fadD,fadE基因的敲除 | 第81页 |
| 3.3.6 工程菌E.coli JM109(PETDuet-tesA’-fabD-ACS-FadR,pACYC-duet-1-aceE-aceF,△fadDE)的构建 | 第81-82页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第82-97页 |
| 3.4.1 pETDuet-1-tesA’-fabD载体的构建 | 第82-85页 |
| 3.4.2 pACYCDuet-1-aceE-aceF载体的构建 | 第85-88页 |
| 3.4.3 pETDuet-1-acs-FadR载体的构建 | 第88-91页 |
| 3.4.4 pETDuet-1-tesA’-fabD-acs-FadR载体的构建 | 第91-93页 |
| 3.4.5 fadD,fadE基因的敲除 | 第93-97页 |
| 3.4.6 工程菌E.coli JM109(PETDuet-tesA’-fabD-ACS-FadR,pACYC-duet-1-aceE-aceF,△fadDE)的构建 | 第97页 |
| 3.5 小结 | 第97-100页 |
| 第四章 大肠杆菌油脂基因工程菌的表征及发酵 | 第100-120页 |
| 4.1 引言 | 第100页 |
| 4.2 试验方法 | 第100-103页 |
| 4.2.1 蛋白诱导表达 | 第100-101页 |
| 4.2.2 工程菌发酵方法 | 第101-102页 |
| 4.2.3 乙酸含量测定方法 | 第102页 |
| 4.2.4 发酵样品处理 | 第102-103页 |
| 4.2.5 脂肪酸测定方法 | 第103页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第103-116页 |
| 4.3.1 蛋白诱导表达 | 第103-105页 |
| 4.3.2 菌株发酵生物量测定 | 第105-107页 |
| 4.3.3 乙酸含量测定 | 第107-108页 |
| 4.3.4 工程菌JM109(DE3,△frdD,△frdE,PET-duet-tesA’-frbD与pACYC-duet-1-aceE-aceF)脂肪酸产量的测定 | 第108-113页 |
| 4.3.5 JM109(DE3,△fadD,△fadE,PET-duet-tesA’-fabD-ACS-FadR与pACYC-duet-1-aceE-aceF)菌株脂肪酸发酵产量 | 第113-115页 |
| 4.3.6 脂肪酸种类分布差异 | 第115-116页 |
| 4.4 小结 | 第116-120页 |
| 第五章 结论与展望 | 第120-124页 |
| 参考文献 | 第124-128页 |
| 附录 | 第128-132页 |
| 附录一 实验药品 | 第128页 |
| 附录二 实验仪器 | 第128-129页 |
| 附录三 常用实验操作 | 第129-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
| 研究成果及已发表的学术论文 | 第134-136页 |
| 作者及导师简介 | 第136-137页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第137-138页 |
