| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号缩写说明 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 托品烷类生物碱的概况 | 第12-14页 |
| 1.2 托品烷类生物碱的生物合成途径 | 第14-15页 |
| 1.3 托品烷类生物碱代谢工程的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4 唐古特山莨菪的相关资料 | 第17-20页 |
| 1.4.1 唐古特山莨菪的生药 | 第17-18页 |
| 1.4.2 唐古特山莨菪的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 本工作的目标及拟解决的问题 | 第20-21页 |
| 第二章 唐古特山莨菪毛状根莨菪碱6β-羟基化酶的克隆、表达及功能分析 | 第21-70页 |
| 2.0 引言 | 第21-23页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第23-26页 |
| 2.1.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.2 设备 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-40页 |
| 2.2.1 AtH6H的克隆 | 第26-32页 |
| 2.2.1.1 总RNA的分离纯化 | 第26页 |
| 2.2.1.2 RT-PCR | 第26-28页 |
| 2.2.1.3 RACE | 第28-31页 |
| 2.2.1.3.1 3′-RACE | 第28-29页 |
| 2.2.1.3.2 5′-RACE | 第29-31页 |
| 2.2.1.4 ORF的获得 | 第31-32页 |
| 2.2.2 AtH6H在E.coli中的表达 | 第32-33页 |
| 2.2.2.1 表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.2.2 AtH6H在E.coli中的表达 | 第33页 |
| 2.2.3 AtH6H的纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.3.1 HiTrap Chelating HP柱层析 | 第34页 |
| 2.2.3.2 DEAE Sepharose Fast Flow柱层析 | 第34页 |
| 2.2.4 AtH6H的功能研究 | 第34-36页 |
| 2.2.4.1 AtH6H催化反应体系 | 第34-35页 |
| 2.2.4.2 AtH6H催化产物的检测与鉴定 | 第35页 |
| 2.2.4.3 AtH6H的性质 | 第35-36页 |
| 2.2.5 重组E.coli对托品烷类生物碱的生物转化 | 第36页 |
| 2.2.5 AtH6H在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达 | 第36-38页 |
| 2.2.5.1 表达载体的构建 | 第37页 |
| 2.2.5.2 质粒的线性化 | 第37页 |
| 2.2.5.3 感受态细胞的制备及电转化 | 第37-38页 |
| 2.2.5.4 酵母表达 | 第38页 |
| 2.2.6 AtH6H的基因组拷贝数分析 | 第38-40页 |
| 2.2.6.1 植物基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.6.2 Southern blotting | 第39-40页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第40-68页 |
| 2.3.1 AtH6H的克隆 | 第40-48页 |
| 2.3.1.1 总RNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.3.1.2 RT-PCR产物序列分析 | 第41-42页 |
| 2.3.1.3 RACE | 第42-48页 |
| 2.3.2 AtH6H在E.coli中的表达纯化及性质研究 | 第48-64页 |
| 2.3.2.1 表达载体的构建 | 第48-51页 |
| 2.3.2.2 AtH6H在E.coli中的表达 | 第51页 |
| 2.3.2.3 AtH6H的纯化 | 第51-52页 |
| 2.3.2.4 AtH6H的性质 | 第52-63页 |
| 2.3.2.4.1 酶催化产物的鉴定 | 第52-60页 |
| 2.3.2.4.2 酶的特性 | 第60-63页 |
| 2.3.2.5 突变体的小发现 | 第63-64页 |
| 2.3.3 重组E.coli对托品烷类生物碱的生物转化 | 第64-65页 |
| 2.3.4 AtH6H在毕赤酵母中的表达 | 第65-67页 |
| 2.3.4.1 表达载体的构建 | 第65-67页 |
| 2.3.4.2 表达预试验 | 第67页 |
| 2.3.5 AtH6H基因组分析 | 第67-68页 |
| 2.4 本章小结 | 第68-70页 |
| 第三章 唐古特山莨菪毛状根腐胺 N-甲基转移酶的克隆、表达及功能分析 | 第70-95页 |
| 3.0 引言 | 第70-71页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第71-73页 |
| 3.1.1 材料 | 第71-72页 |
| 3.1.2 设备 | 第72-73页 |
| 3.2 方法 | 第73-80页 |
| 3.2.1 AtPMT的克隆 | 第73-77页 |
| 3.2.1.1 总RNA的分离纯化 | 第73页 |
| 3.2.1.2 RT-PCR | 第73-74页 |
| 3.2.1.3 RACE | 第74-76页 |
| 3.2.1.3.1 3′-RACE | 第74-75页 |
| 3.2.1.3.2 5′-RACE | 第75-76页 |
| 3.2.1.4 ORF的获得 | 第76-77页 |
| 3.2.2 AtPMT在E.coli中的表达 | 第77-78页 |
| 3.2.2.1 表达载体的构建 | 第77页 |
| 3.2.2.2 AtPMT在E.coli中的表达 | 第77-78页 |
| 3.2.3 AtPMT的纯化 | 第78-79页 |
| 3.2.3.1 HiTrap Chelating HP柱层析 | 第78页 |
| 3.2.3.2 DEAE Sepharose Fast Flow柱层析 | 第78-79页 |
| 3.2.4 AtPMT的功能研究 | 第79-80页 |
| 3.2.4.1 AtPMT催化反应体系 | 第79页 |
| 3.2.4.2 催化产物的检测与鉴定 | 第79页 |
| 3.2.4.3 AtPMT的性质 | 第79-80页 |
| 3.2.5 重组E.coli对腐胺的生物转化 | 第80页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第80-93页 |
| 3.3.1 AtPMT的克隆 | 第80-84页 |
| 3.3.1.1 RT-PCR产物序列分析 | 第80-81页 |
| 3.3.1.2 RACE | 第81-84页 |
| 3.3.2 AtPMT在E.coli中的表达纯化及性质研究 | 第84-92页 |
| 3.3.2.1 表达载体的构建 | 第84-88页 |
| 3.3.2.2 AtPMT在E.coli中的表达 | 第88页 |
| 3.3.2.3 AtPMT的纯化 | 第88-89页 |
| 3.3.2.4 AtPMT的性质 | 第89-92页 |
| 3.3.2.4.1 催化产物的鉴定 | 第89-91页 |
| 3.3.2.4.2 酶的特性 | 第91-92页 |
| 3.3.3 重组E.coli对腐胺的生物转化 | 第92-93页 |
| 3.4 本章小结 | 第93-95页 |
| 第四章 唐古特山莨菪毛状根托品酮还原酶的克隆 | 第95-105页 |
| 4.0 引言 | 第95-96页 |
| 4.1 实验材料与设备 | 第96-97页 |
| 4.1.1 材料 | 第96-97页 |
| 4.1.2 设备 | 第97页 |
| 4.2 方法 | 第97-100页 |
| 4.2.1 AtTR的克隆 | 第97-100页 |
| 4.2.1.1 总RNA的分离纯化 | 第97页 |
| 4.2.1.2 RT-PCR | 第97-98页 |
| 4.2.1.3 RACE | 第98-100页 |
| 4.2.1.3.1 3′-RACE | 第98-99页 |
| 4.2.1.3.2 5′-RACE | 第99-100页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第100-103页 |
| 4.3.1 AtTR的克隆 | 第100-103页 |
| 4.3.1.1 RT-PCR产物序列分析 | 第100-102页 |
| 4.3.1.2 RACE | 第102-103页 |
| 4.4 本章小结 | 第103-105页 |
| 总结 | 第105-106页 |
| 综述1：α-酮戊二酸依赖性双加氧酶的生化和分子生物学研究进展 | 第106-123页 |
| 综述2：植物中生物碱的生化和分子生物学研究进展 | 第123-149页 |
| 参考文献 | 第149-171页 |
| 博士在读期间发表的学术论文 | 第171-172页 |
| 致谢 | 第172-173页 |
| 原创性及知识产权声明 | 第173页 |
