| 目录 | 第2-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 前言 | 第12-28页 |
| 1.心肌肥厚(大)(cardiac hypertrophy)概述 | 第12-15页 |
| 2.心肌肥厚(大)发生的机制 | 第15-24页 |
| 2.1 心肌肥厚的诱发因素 | 第15-16页 |
| 2.2 心肌细胞表面上的信号传感器 | 第16-17页 |
| 2.3 心肌细胞肥大的信号转导途径 | 第17-23页 |
| 2.3.1 蛋白激酶C(PKC)及其介导的信号转导途径 | 第18-19页 |
| 2.3.2 丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)及其介导的信号转导途径 | 第19-20页 |
| 2.3.3 磷脂酰肌醇-3激酶(P13K)及其介导的信号转导途径 | 第20-21页 |
| 2.3.4 Ca~(2+)及其依赖的信号转导途径 | 第21-23页 |
| 2.3.5 其它途径如JAK／STAT及其介导的信号途径 | 第23页 |
| 2.4 血管紧张素Ⅱ导致心肌肥大的机制 | 第23-24页 |
| 3.心肌肥厚治疗药物的研究现状 | 第24-25页 |
| 4.异丹叶大黄素及其类似物白藜芦醇生物活性研究概况 | 第25-27页 |
| 5.本研究的主要内容 | 第27-28页 |
| 材料与方法 | 第28-49页 |
| 1.实验材料 | 第28-31页 |
| 1.1 实验动物 | 第28页 |
| 1.2 实验主要试剂(ISO、激活剂、抑制剂) | 第28页 |
| 1.3 其它试剂和试剂盒 | 第28-29页 |
| 1.4 抗体 | 第29-30页 |
| 1.5 放射性核素 | 第30页 |
| 1.6 主要实验仪器与设备 | 第30-31页 |
| 2.实验方法 | 第31-49页 |
| 2.1 实验流程 | 第31-32页 |
| 2.2 新生大鼠心肌细胞分离和培养 | 第32-33页 |
| 2.2.1 心肌细胞的分离 | 第32页 |
| 2.2.2 心肌细胞的纯化 | 第32页 |
| 2.2.3 心肌细胞生长和活力观察 | 第32-33页 |
| 2.4.4 心肌细胞的处理 | 第33页 |
| 2.3 乳酸脱氢酶(LDH)释放测定 | 第33-34页 |
| 2.4 [~3H]亮氨酸掺入分析 | 第34页 |
| 2.5 活性氧(ROS)测定 | 第34-35页 |
| 2.6 心肌细胞H_2O_2水平定量分析 | 第35页 |
| 2.7 抗氧化酶活性和脂质过氧化水平分析 | 第35-36页 |
| 2.7.1 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 | 第35页 |
| 2.7.2 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性测定 | 第35页 |
| 2.7.3 脂质过氧化(MDA)测定 | 第35-36页 |
| 2.8 蛋白印迹分析(Western blot) | 第36-40页 |
| 2.8.1 试剂准备 | 第36-38页 |
| 2.8.2 蛋白提取 | 第38页 |
| 2.8.3 SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
| 2.8.4 电转移 | 第39页 |
| 2.8.5 杂交 | 第39-40页 |
| 2.9 凝胶电泳迁移率分析(EMSA) | 第40-45页 |
| 2.9.1 试剂准备 | 第40-41页 |
| 2.9.2 细胞核蛋白提取 | 第41-42页 |
| 2.9.3 探针设计 | 第42-43页 |
| 2.9.4 探针退火 | 第43页 |
| 2.9.5 探针的标记 | 第43页 |
| 2.9.6 探针的纯化 | 第43页 |
| 2.9.7 8％非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第43-44页 |
| 2.9.8 核蛋白与标记的DNA结合 | 第44-45页 |
| 2.9.9 电泳及放射自显影 | 第45页 |
| 2.10 IKK和GSK3β激酶活性分析 | 第45-46页 |
| 2.10.1 IKK活性分析 | 第45-46页 |
| 2.10.2 GSK3β活性分析[Bharti, Donato et al. 2003] | 第46页 |
| 2.11 大鼠压力负荷型心肌肥厚模型的建立 | 第46-47页 |
| 2.11.1 动物模型建立 | 第46-47页 |
| 2.11.2 动物分组和给药方法 | 第47页 |
| 2.11.3 超声心动图分析 | 第47页 |
| 2.11.4 心重和体重的测定 | 第47页 |
| 2.12 组织病理学分析 | 第47-48页 |
| 2.13 统计学分析 | 第48-49页 |
| 实验结果 | 第49-70页 |
| 1.大鼠心肌细胞的鉴定和药物对细胞活性的影响分析 | 第49-50页 |
| 2.异丹叶大黄素(ISO)对心肌肥厚发生的影响 | 第50-53页 |
| 2.1 对血管紧张素介导的心肌细胞肥大发生的影响 | 第50-52页 |
| 2.2 对压力超负荷诱导的大鼠心肌肥厚的影响 | 第52-53页 |
| 3.ISO对心肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响 | 第53-55页 |
| 4.ISO对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响 | 第55-56页 |
| 5.ISO抑制AngⅡ诱导的转录因子NF-κB和AP-1活化 | 第56-60页 |
| 5.1 ISO对NF-κB和AP-1活性的影响 | 第56-57页 |
| 5.2 ISO对IκBα磷酸化与降解以及IKKβ活性的影响 | 第57-58页 |
| 5.3 ISO对c-Fos and c-Jun蛋白表达的影响 | 第58-59页 |
| 5.4 NF-κB和AP-1活性对心肌细胞肥大发生的影响 | 第59-60页 |
| 6.ISO对PI3K-Akt-GSK3β／p70S6K信号传导途径的影响 | 第60-63页 |
| 7.PKC对MAPK信号途径以及NF-κB和AP-1活性的影响 | 第63-65页 |
| 8.ISO对心肌细胞活性氧(ROS)、过氧化氢,丙二醛含量和抗氧化酶活性的影响 | 第65-70页 |
| 讨论 | 第70-82页 |
| 1.细胞(体外)和动物(体内)心肌肥厚模型的建立以及ISO的心肌肥厚抑制作用 | 第70-71页 |
| 2.ISO抑制心肌肥厚的分子机制 | 第71-81页 |
| 2.1 ISO的抗氧化作用是其抑制心肌肥厚的基本机制 | 第72-75页 |
| 2.2 异丹叶大黄素通过干预心肌细胞内多条信号转导通路从而抑制心肌肥厚发生 | 第75-81页 |
| 3.ISO治疗心肌肥厚的应用前景 | 第81-82页 |
| 小结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 文献综述 | 第93-105页 |
| 英文名词及缩写 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 个人简历 | 第108页 |
