| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 水生动物病毒细胞表面受体研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1 病毒受体的生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.2 鱼类病毒表面受体的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.3 水生无脊椎动物病毒受体研究进展 | 第18页 |
| 1.4 水生动物病毒受体研究进展小结 | 第18-19页 |
| 2 呼肠孤病毒入胞机制的研究进展 | 第19-23页 |
| 2.1 病毒主要入胞吞途径的分类 | 第20-22页 |
| 2.2 呼肠孤病毒入胞机制的研究进展 | 第22-23页 |
| 3 研究展望 | 第23-26页 |
| 第二章 酵母双杂交筛选与GCRV外衣壳蛋白互作蛋白 | 第26-43页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株 | 第26-27页 |
| 2.1.3 质粒 | 第27页 |
| 2.1.4 试剂耗材 | 第27页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 草鱼cDNA文库的构建 | 第28-34页 |
| 2.2.2 GCRV病毒外衣壳蛋白与草鱼宿主蛋白互作筛选 | 第34-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-40页 |
| 2.3.1 草鱼Total RNA和mRNA的分离 | 第36-37页 |
| 2.3.2 草鱼ds cDNA的合成及短片段的去除 | 第37-38页 |
| 2.3.3 草鱼cDNA文库的鉴定 | 第38页 |
| 2.3.4 钓饵质粒pGBK-VP5和pGBK-VP7的构建 | 第38-39页 |
| 2.3.5 GCRV-VP5蛋白与草鱼cDNA文库互作筛选 | 第39-40页 |
| 2.3.6 GCRV-VP7蛋白与草鱼cDNA文库互作筛选 | 第40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 LamR与GCRV-VP5相互作用关系的鉴定 | 第43-76页 |
| 3.1 材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 实验用鱼和其它动物 | 第43-44页 |
| 3.1.2 细胞株和病毒株 | 第44页 |
| 3.1.3 质粒 | 第44页 |
| 3.1.4 试剂耗材 | 第44页 |
| 3.1.5 仪器设备 | 第44-45页 |
| 3.2 方法 | 第45-58页 |
| 3.2.1 草鱼LamR基因序列Race扩增 | 第45-48页 |
| 3.2.2 LamR蛋白原核表达及其多克隆抗体制备 | 第48-49页 |
| 3.2.3 GCRV病毒的扩增和电镜观察 | 第49-50页 |
| 3.2.4 GCRV病毒与LamR在CIK细胞中的定位分析 | 第50-51页 |
| 3.2.5 GCRV病毒与LamR蛋白的相互作用 | 第51-52页 |
| 3.2.6 GCRV外衣壳蛋白与LamR蛋白的相互作用 | 第52-55页 |
| 3.2.7 LamR的敲降对GCRV病毒吸附的影响 | 第55-58页 |
| 3.2.8 LamR多克隆抗体封闭细胞对GCRV病毒感染的影响 | 第58页 |
| 3.2.9 统计学分析 | 第58页 |
| 3.3 结果 | 第58-73页 |
| 3.3.1 LamR序列扩增和分析 | 第58-61页 |
| 3.3.2 草鱼LamR进化分析 | 第61-62页 |
| 3.3.3 LamR蛋白原核表达及其多克隆抗体制备 | 第62-64页 |
| 3.3.4 GCRV病毒的扩增和电镜观察 | 第64页 |
| 3.3.5 GCRV病毒与LamR在CIK细胞中的定位分析 | 第64-67页 |
| 3.3.6 GCRV病毒与LamR蛋白的相互作用 | 第67-68页 |
| 3.3.7 GCR-VP5外衣壳蛋白与LamR蛋白的相互作用 | 第68-70页 |
| 3.3.8 LamR的敲降降低GCRV病毒吸附感染效率 | 第70-72页 |
| 3.3.9 LamR的多克隆抗体封闭细胞降低GCRV病毒感染 | 第72-73页 |
| 3.4 讨论 | 第73-76页 |
| 第四章 EGCG拮抗GCRV病毒研究 | 第76-88页 |
| 4.1 材料 | 第76-77页 |
| 4.1.1 实验用鱼 | 第76页 |
| 4.1.2 细胞株和病毒株 | 第76页 |
| 4.1.3 试剂耗材 | 第76-77页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第77页 |
| 4.2 方法 | 第77-80页 |
| 4.2.1 草鱼LamR蛋白质组织分布 | 第77-78页 |
| 4.2.2 GCRV病毒感染CIK细胞过程中LamR变化情况 | 第78页 |
| 4.2.3 EGCG抗GCRV病毒感染的研究 | 第78-80页 |
| 4.3 结果 | 第80-86页 |
| 4.3.1 草鱼LamR蛋白质组织分布 | 第80-81页 |
| 4.3.2 GCRV感染CIK细胞时LamR基因的变化水平 | 第81页 |
| 4.3.3 EGCG和GTE的HPLC检测 | 第81-83页 |
| 4.3.4 EGCG和GTE安全浓度检测 | 第83-84页 |
| 4.3.5 EGCG抑制GCRV病毒的感染 | 第84页 |
| 4.3.6 GTE抑制GCRV病毒的感染 | 第84-85页 |
| 4.3.7 IFA验证EGCG和GTE抑制GCRV病毒的感染 | 第85-86页 |
| 4.4 讨论 | 第86-88页 |
| 第五章 GCRV侵染草鱼细胞依赖于Clathrin介导的途径 | 第88-106页 |
| 5.1 材料 | 第88-89页 |
| 5.1.1 实验用鱼 | 第88页 |
| 5.1.2 细胞株和病毒株 | 第88-89页 |
| 5.1.3 试剂耗材 | 第89页 |
| 5.1.4 仪器设备 | 第89页 |
| 5.2 方法 | 第89-92页 |
| 5.2.1 内吞体抑制剂安全浓度检测 | 第89-90页 |
| 5.2.2 抑制剂对GCRV病毒感染的影响 | 第90页 |
| 5.2.3 GCRV病毒与Clathrin共定位分析 | 第90-91页 |
| 5.2.4 抑制剂对GCRV病毒进入的影响 | 第91-92页 |
| 5.2.5 统计学分析 | 第92页 |
| 5.3 结果 | 第92-103页 |
| 5.3.1 MTT法检测安全浓度 | 第92-94页 |
| 5.3.2 Count & Viability Reagent法检测安全浓度 | 第94-96页 |
| 5.3.3 GCRV病毒通过clathrin-dependent途径感染宿主 | 第96-99页 |
| 5.3.4 GCRV病毒与Clathrin共定位分析 | 第99-100页 |
| 5.3.5 GCRV病毒依赖dynamin-dependent途径进入宿主 | 第100页 |
| 5.3.6 GCRV病毒依赖低pH环境途径进入宿主 | 第100-103页 |
| 5.4 讨论 | 第103-106页 |
| 全文小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-116页 |
| 博士期间科研成果 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
