| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 引言 | 第15-27页 |
| 1 TLR及其信号通路研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1 TLRs发现 | 第15页 |
| 1.2 TLRs结构、分布 | 第15-16页 |
| 1.3 TLRs配体 | 第16-18页 |
| 1.4 TLR的信号转导机制 | 第18-19页 |
| 2 TLRS的抗感染免疫 | 第19-21页 |
| 2.1 TLRs与抗细菌感染 | 第19页 |
| 2.2 TLRs与抗真菌感染 | 第19-20页 |
| 2.3 TLRs与抗病毒感染 | 第20-21页 |
| 2.4 TLRs与抗寄生虫感染 | 第21页 |
| 3 鱼类TLRS的功能研究 | 第21-23页 |
| 4 罗非鱼常见病害 | 第23-26页 |
| 4.1 细菌性疾病 | 第23-25页 |
| 4.1.1 链球菌病 | 第23-24页 |
| 4.1.2 柱状黄杆菌病 | 第24页 |
| 4.1.3 嗜水气单胞菌病 | 第24页 |
| 4.1.4 爱德华氏菌病 | 第24页 |
| 4.1.5 竖鳞病 | 第24页 |
| 4.1.6 假单胞菌病 | 第24页 |
| 4.1.7 弧菌病 | 第24页 |
| 4.1.8 弗朗西斯氏菌病（Francisella asiatica） | 第24页 |
| 4.1.9 立克次氏体败血症 | 第24-25页 |
| 4.2 寄生虫病 | 第25页 |
| 4.2.1 车轮虫病 | 第25页 |
| 4.2.2 小瓜虫病 | 第25页 |
| 4.2.3 斜管虫病 | 第25页 |
| 4.2.4 指环虫病 | 第25页 |
| 4.2.5 三代虫病 | 第25页 |
| 4.3 真菌性疾病 | 第25-26页 |
| 4.4 病毒病 | 第26页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章尼罗罗非鱼TLRS全长CDNA及基因组序列克隆 | 第27-73页 |
| 1 材料与方法 | 第27-38页 |
| 1.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第27页 |
| 1.1.2 试验用试剂 | 第27-28页 |
| 1.1.3 其它试剂 | 第28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-38页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第28-31页 |
| 1.2.2 尼罗罗非鱼基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 1.2.3 尼罗罗非鱼鳃总RNA的提取 | 第32页 |
| 1.2.4 c DNA合成 | 第32-34页 |
| 1.2.5 尼罗罗非鱼TLRs基因c DNA及基因组序列的扩增克隆 | 第34-35页 |
| 1.2.6 PCR扩增片段的琼脂糖凝胶回收 | 第35-36页 |
| 1.2.7 PCR纯化产物的克隆 | 第36-37页 |
| 1.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第37页 |
| 1.2.9 阳性菌落检测及测序 | 第37-38页 |
| 1.2.10 尼罗罗非鱼TLRs基因的基因组序列的扩增 | 第38页 |
| 1.3 分析方法 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-70页 |
| 2.1 尼罗罗非鱼鳃组织总RNA的提取及鳍条基因组提取 | 第38-39页 |
| 2.2 尼罗罗非鱼TLRs类基因序列克隆 | 第39-70页 |
| 2.2.1 TLR2序列分析 | 第39-42页 |
| 2.2.2 TLR3序列分析 | 第42-47页 |
| 2.2.3 TLR5序列分析 | 第47-51页 |
| 2.2.4 TLR13序列分析 | 第51-55页 |
| 2.2.5 On TLR21序列分析 | 第55-60页 |
| 2.2.6 On TLR22序列分析 | 第60-65页 |
| 2.2.7 On TLR23序列分析 | 第65-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 小结 | 第72-73页 |
| 第三章 尼罗罗非鱼TLRS基因表达谱分析 | 第73-92页 |
| 1 材料与方法 | 第73-76页 |
| 1.1 实验鱼和菌种 | 第73页 |
| 1.2 主要试剂 | 第73页 |
| 1.3 实验方法 | 第73-76页 |
| 1.3.1 引物设计 | 第73-74页 |
| 1.3.2 实时定量PCR实验的标准曲线模板质粒的构建 | 第74-75页 |
| 1.3.3 实时定量PCR实验 | 第75页 |
| 1.3.4 健康尼罗罗非鱼TLRs基因的组织表达 | 第75页 |
| 1.3.5 尼罗罗非鱼TLRs基因在胚胎发育过程中的表达 | 第75-76页 |
| 1.3.6 感染罗非鱼无乳链球菌后尼罗罗非鱼TLRs基因的组织表达变化 | 第76页 |
| 1.3.7 统计方法 | 第76页 |
| 2 结果 | 第76-89页 |
| 2.1 尼罗罗非鱼总RNA的提取 | 第76-77页 |
| 2.2 目的基因和内参基因的标准曲线 | 第77页 |
| 2.3 目的基因和内参基因的扩增曲线 | 第77-78页 |
| 2.4 目的基因和内参基因的溶解曲线 | 第78-79页 |
| 2.5 健康尼罗罗非鱼TLRs基因的组织表达 | 第79-82页 |
| 2.6 TLRs基因在尼罗罗非鱼胚胎发育过程中表达 | 第82-85页 |
| 2.7 尼罗罗非鱼感染无乳链球菌后TLRs基因表达谱 | 第85-89页 |
| 3 讨论 | 第89-91页 |
| 小结 | 第91-92页 |
| 第四章 罗非鱼鱼体内过表达TLRS基因后，对尼罗罗非鱼TLR信号通路相关下游基因表达影响 | 第92-102页 |
| 1 实验材料 | 第92页 |
| 1.1 实验材料 | 第92页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第92页 |
| 1.1.2 试验用试剂 | 第92页 |
| 2 实验方法 | 第92-95页 |
| 2.1 引物设计 | 第92-93页 |
| 2.2 尼罗罗非鱼TLRs基因的真核表达载体构建 | 第93-94页 |
| 2.3 无内毒素质粒的提取 | 第94-95页 |
| 2.4 感染实验及样品采集 | 第95页 |
| 2.5 实时定量PCR实验准备 | 第95页 |
| 2.6 统计分析 | 第95页 |
| 3 结果与分析 | 第95-100页 |
| 3.1 尼罗罗非鱼总RNA的提取及真核表达载体构建 | 第95-96页 |
| 3.2 目的基因和内参基因的标准曲线 | 第96页 |
| 3.3 接头及下游信号分子基因表达谱 | 第96-100页 |
| 4 讨论 | 第100-101页 |
| 小结 | 第101-102页 |
| 第五章 哺乳动物细胞系中过表达尼罗罗非鱼TLRS基因对NF-ΚB活性的影响 | 第102-108页 |
| 1 实验材料 | 第102-103页 |
| 2 实验方法 | 第103-105页 |
| 2.1 尼罗罗非鱼TLRs基因引物设计及真核表达载体构建 | 第103页 |
| 2.2 质粒转染 293T细胞 | 第103-104页 |
| 2.3 双荧光素酶报告基因检测 | 第104页 |
| 2.4 细胞定位 | 第104页 |
| 2.5 统计分析 | 第104-105页 |
| 3 结果 | 第105-106页 |
| 3.1 过表达On TLR2、On TLR21、On TLR22和On TLR23对NF-κB活性影响 | 第105页 |
| 3.2 细胞定位 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-107页 |
| 小结 | 第107-108页 |
| 第六章 TLR22和TLR23基因多态性及其与尼罗罗非鱼链球菌抗性的关系 | 第108-116页 |
| 1 材料与方法 | 第108-110页 |
| 1.1 实验材料 | 第108页 |
| 1.2 主要试剂 | 第108-109页 |
| 1.3 实验方法 | 第109-110页 |
| 1.3.1 引物设计 | 第109页 |
| 1.3.2 DNA提取和PCR扩增 | 第109页 |
| 1.3.3 PCR产物的克隆与测序 | 第109页 |
| 1.3.4 序列多态性分析 | 第109-110页 |
| 2 结果 | 第110-114页 |
| 2.1 OnTLR22基因序列测定及多态性位点分析 | 第110-113页 |
| 2.2 OnTLR23基因序列测定及多态性位点分析 | 第113-114页 |
| 3 讨论 | 第114-115页 |
| 小结 | 第115-116页 |
| 全文总结 | 第116-118页 |
| 1 尼罗罗非鱼TLRS基因CDNA克隆 | 第116页 |
| 2 尼罗罗非鱼TLRS基因的组织表达及胚胎发育过程中的表达 | 第116-117页 |
| 3. 罗非鱼鱼体内过表达TLRS基因后，对尼罗罗非鱼TLR信号通路相关下游基因表达影响 | 第117页 |
| 4. 哺乳动物细胞系中过表达尼罗罗非鱼TLRS基因对NF-ΚB活性的影响 | 第117页 |
| 5. TLRS基因多态性与罗非鱼链球菌抗性的关系 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-131页 |
| 附录一 本实验所用载体图谱 | 第131-133页 |
| 附录二 缩略词表 | 第133-134页 |
| 附录三 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第134-135页 |
| 附录四 广东养殖尼罗罗非鱼3个不同群体MHC_B基因序列多态性和遗传分化 | 第135-146页 |
| 致谢 | 第146页 |
