| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 L-异亮氨酸概述 | 第11页 |
| 1.2 L-异亮氨酸的应用及市场 | 第11-13页 |
| 1.2.1 在食品、饲料工业中应用 | 第11-12页 |
| 1.2.2 在医药工业上应用 | 第12-13页 |
| 1.2.3 在化妆品行业中应用 | 第13页 |
| 1.3 L-异亮氨酸的生产方法 | 第13-14页 |
| 1.3.1 提取法 | 第13页 |
| 1.3.2 化学合成法 | 第13页 |
| 1.3.3 微生物发酵法 | 第13-14页 |
| 1.4 L-异亮氨酸的生物合成及代谢调控 | 第14-18页 |
| 1.4.1 苏氨酸脱水酶 | 第14-15页 |
| 1.4.2 乙酰羟酸合酶 | 第15-17页 |
| 1.4.3 乙酰羟酸异构还原酶 | 第17-18页 |
| 1.4.4 二羟酸脱水酶 | 第18页 |
| 1.4.5 转氨酶 | 第18页 |
| 1.5 L-异亮氨酸生产状况 | 第18-19页 |
| 1.6 L-异亮氨酸高产菌育种思策略 | 第19-20页 |
| 1.6.1 L-异亮氨酸高产菌株应具备的特征 | 第19页 |
| 1.6.2 选育L-异亮氨酸高产菌株的具体方法 | 第19-20页 |
| 1.7 L-异亮氨酸育种状况 | 第20-22页 |
| 1.8 本论文的主要研究内容 | 第22-24页 |
| 1.8.1 立题依据 | 第22-23页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 L-异亮氨酸产生菌的传统诱变育种 | 第24-38页 |
| 2.1 前言 | 第24-25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2.4 主要溶液与培养基配方 | 第26-27页 |
| 2.2.5 菌体培养方法 | 第27页 |
| 2.2.6 ARTP诱变方法 | 第27页 |
| 2.2.7 筛选方法 | 第27-28页 |
| 2.2.8 出发菌株 16S rDNA分子鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.9 分析方法 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-37页 |
| 2.3.1 出发菌株的选择和遗传标记的鉴定 | 第30-32页 |
| 2.3.2 ARTP诱变 | 第32-34页 |
| 2.3.3 抗性突变株的筛选 | 第34-36页 |
| 2.3.4 菌株ART-I (I4-113)的选育谱系 | 第36页 |
| 2.3.5 菌株ART-I的遗传稳定性 | 第36-37页 |
| 2.3.6 菌株Q-5 与ART-I发酵特性比较 | 第37页 |
| 2.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 构建抗反馈抑制的TDFbr突变体及其对产酸的影响 | 第38-55页 |
| 3.1 前言 | 第38-39页 |
| 3.2 材料与方法 | 第39-46页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第39-40页 |
| 3.2.2 试剂和仪器 | 第40页 |
| 3.2.3 培养基和培养条件 | 第40-41页 |
| 3.2.4 分子生物学操作 | 第41-44页 |
| 3.2.5 构建B. flavum、E. coli重组菌 | 第44-45页 |
| 3.2.6 重组体稳定性实验 | 第45页 |
| 3.2.7 重组体蛋白的表达分析 | 第45页 |
| 3.2.8 目的蛋白纯化和含量测定 | 第45页 |
| 3.2.9 TD酶活性分析 | 第45-46页 |
| 3.2.10 发酵参数测定 | 第46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-55页 |
| 3.3.1 菌株ART-I中TD编码基因的克隆表达 | 第46页 |
| 3.3.2 菌株ART-I中TDART的酶学性质 | 第46-47页 |
| 3.3.3 TD酶突变体的获取及其表达纯化 | 第47-51页 |
| 3.3.4 TD突变体的酶学性质研究 | 第51-52页 |
| 3.3.5 TD及其突变体对L-异亮氨酸产量的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.6 本章小结 | 第53-55页 |
| 第四章 构建抗反馈抑制的AHASFbr突变体及其对产酸的影响 | 第55-70页 |
| 4.1 前言 | 第55页 |
| 4.2 材料与方法 | 第55-60页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第55页 |
| 4.2.2 试剂和仪器 | 第55-57页 |
| 4.2.4 分子生物学操作 | 第57-58页 |
| 4.2.5 过表达AHAS重组菌的构建 | 第58-59页 |
| 4.2.6 重组体稳定性实验 | 第59页 |
| 4.2.7 重组菌蛋白的表达分析 | 第59页 |
| 4.2.8 目的蛋白纯化和含量测定 | 第59-60页 |
| 4.2.9 AHAS酶活性分析 | 第60页 |
| 4.2.10 发酵参数测定 | 第60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-68页 |
| 4.3.1 菌株ART-I中AHAS编码基因的克隆表达 | 第60-61页 |
| 4.3.2 菌株ART-I中AHASART的酶学性质 | 第61-62页 |
| 4.3.3 AHAS酶突变体的获取及其表达纯化 | 第62-64页 |
| 4.3.4 AHAS及其突变体的酶学性质研究 | 第64-66页 |
| 4.3.5 AHAS及其突变体对L-异亮氨酸产量的影响 | 第66-68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-70页 |
| 第五章 重组菌株ART-I-3 L-异亮氨酸发酵条件优化 | 第70-80页 |
| 5.1 前言 | 第70页 |
| 5.2 材料与方法 | 第70-71页 |
| 5.2.1 菌株 | 第70页 |
| 5.2.2 试剂和仪器 | 第70-71页 |
| 5.2.3 培养基和培养条件 | 第71页 |
| 5.2.4 7 L发酵罐分批补料发酵 | 第71页 |
| 5.2.5 响应面试验设计 | 第71页 |
| 5.2.6 发酵参数测定 | 第71页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第71-78页 |
| 5.3.1 重组菌发酵培养基优化 | 第71-73页 |
| 5.3.2 发酵培养基优化 | 第73-76页 |
| 5.3.3 发酵优化 | 第76-78页 |
| 5.3.4 7 L罐发酵实验 | 第78页 |
| 5.4 本章小结 | 第78-80页 |
| 第六章 野生型菌株中利用TD及AHAS突变体转化L-苏氨酸产L-异亮氨酸 | 第80-90页 |
| 6.1 前言 | 第80页 |
| 6.2 材料与方法 | 第80-83页 |
| 6.2.1 菌株和质粒 | 第80页 |
| 6.2.2 试剂和仪器 | 第80-81页 |
| 6.2.3 培养基和培养条件 | 第81页 |
| 6.2.4 分子生物学操作 | 第81-82页 |
| 6.2.5 构建C. glutamicum Δldh系列重组菌 | 第82-83页 |
| 6.2.6 重组体稳定性实验 | 第83页 |
| 6.2.7 TD与AHAS酶活性分析 | 第83页 |
| 6.2.8 发酵参数测定 | 第83页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第83-88页 |
| 6.3.1 敲除ldh基因 | 第83-84页 |
| 6.3.2 C. glutamicum Δldh系列重组菌发酵性能 | 第84-85页 |
| 6.3.3 重组菌转化苏氨酸的研究 | 第85-88页 |
| 6.4 本章小结 | 第88-90页 |
| 主要结论与展望 | 第90-92页 |
| 论文主要创新点 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-102页 |
| 附录 | 第102-105页 |
