| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 嗜热真菌研究概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 嗜热真菌的分类 | 第10页 |
| 1.1.2 嗜热真菌的应用前景 | 第10-11页 |
| 1.2 嗜热毁丝霉的纤维素酶表达调控研究概述 | 第11-12页 |
| 1.3 RNA干扰技术概述 | 第12-14页 |
| 1.3.1 RNA干扰技术的特点 | 第12-13页 |
| 1.3.1.1 RNA干扰的部分抑制 | 第12页 |
| 1.3.1.2 RNA干扰的序列特异性 | 第12-13页 |
| 1.3.1.3 RNA干扰的脱靶效应 | 第13页 |
| 1.3.2 RNA干扰在丝状真菌中的应用 | 第13-14页 |
| 1.4 RNA-Seq及在寻找新型转录因子上的应用 | 第14-16页 |
| 1.5 主要研究内容及意义 | 第16-17页 |
| 第2章 嗜热毁丝霉中糖转运蛋白STL1的同源过表达 | 第17-39页 |
| 2.1 材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 培养基 | 第17-18页 |
| 2.1.3 试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.1.5 寡核苷酸引物 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 菌种的基本培养方法及保种 | 第21-22页 |
| 2.2.2 嗜热毁丝霉基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.3 嗜热毁丝霉Mtstl1基因的扩增及过表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.3.1 Mtstl1基因的扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.3.2 Mtstl1基因过表达载体盒的构建 | 第23页 |
| 2.2.4 嗜热毁丝霉的原生质体制备和转化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 嗜热毁丝霉的样品c DNA制备 | 第24-26页 |
| 2.2.5.1 总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.5.2 去基因组DNA处理 | 第25页 |
| 2.2.5.3 反转录反应 | 第25-26页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR测定m RNA的相对表达量 | 第26-27页 |
| 2.2.7 纤维素酶活测定和蛋白浓度测定 | 第27-31页 |
| 2.2.7.1 转化子纯化和孢子悬液的制备 | 第28页 |
| 2.2.7.2 产酶发酵培养和粗酶液的提取 | 第28页 |
| 2.2.7.3 葡萄糖标准曲线绘制 | 第28-29页 |
| 2.2.7.4 滤纸酶活（FPA）的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.7.5 内切 β-1,4-葡萄糖苷酶活（EGase）的测定 | 第30页 |
| 2.2.7.6 β-葡萄糖苷酶活（BGase）的测定 | 第30页 |
| 2.2.7.7 总分泌蛋白浓度的测定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-37页 |
| 2.3.1 Mtstl1过表达重组菌株的获得 | 第31-34页 |
| 2.3.2 阳性转化子stl1过表达水平的荧光定量分析 | 第34页 |
| 2.3.3 S02转化子酶活和总蛋白含量分析 | 第34-36页 |
| 2.3.4 主要纤维素酶基因的荧光定量分析 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第3章 嗜热毁丝霉中AZF1的RNAi | 第39-49页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第39页 |
| 3.1.2 培养基 | 第39页 |
| 3.1.3 试剂 | 第39页 |
| 3.1.4 仪器与设备 | 第39页 |
| 3.1.5 寡核苷酸引物 | 第39-40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 3.2.1 azf1的si RNA设计和合成 | 第40页 |
| 3.2.2 寡核苷酸单链的退火 | 第40-41页 |
| 3.2.3 azf1的RNA干扰表达盒的构建 | 第41页 |
| 3.2.4 嗜热毁丝霉的原生质体制备和转化 | 第41页 |
| 3.2.5 嗜热毁丝霉的样品c DNA制备 | 第41页 |
| 3.2.6 荧光定量PCR测定m RNA的相对表达量 | 第41页 |
| 3.2.7 纤维素酶活测定和蛋白浓度测定 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.3.1 azf1的RNA干扰重组株的获得 | 第41-44页 |
| 3.3.2 阳性转化子azf1表达水平的荧光定量分析 | 第44-45页 |
| 3.3.3 A02转化子酶活和总蛋白含量分析 | 第45-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第63页 |
