| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 前言 | 第19-25页 |
| 1. 骨肉瘤相关的研究现状 | 第19-21页 |
| 2. PTEN基因 | 第21-22页 |
| 3. PTEN基因在骨肉瘤细胞中的表达 | 第22-25页 |
| 第一部分、PTEN基因在骨肉瘤组织中的表达 | 第25-30页 |
| 1. 材料与方法 | 第25-26页 |
| 1.1 病历资料 | 第25页 |
| 1.2 实验试剂 | 第25页 |
| 1.3 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2. 实验步骤 | 第26-27页 |
| 2.1 HE染色 | 第26页 |
| 2.2 免疫组织化学 | 第26-27页 |
| 2.3 结果判定 | 第27页 |
| 3. 数据处理 | 第27-28页 |
| 4. 结果 | 第28-30页 |
| 第二部分、PTEN基因表达载体的构建 | 第30-53页 |
| 1. 材料与方法 | 第30-34页 |
| 1.1 淋巴细胞的分离和提取 | 第30页 |
| 1.2 质粒、大肠杆菌菌株和人骨肉瘤U2-OS细胞系 | 第30页 |
| 1.3 实验试剂 | 第30-31页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第31-33页 |
| 1.5 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2. 实验步骤 | 第34-47页 |
| 2.1 人体正常组织中PTEN基因的表达 | 第34页 |
| 2.2 外周血淋巴细胞的分离提取 | 第34-35页 |
| 2.3 提取淋巴细胞的总RNA | 第35页 |
| 2.4 细胞总RNA的纯度测定 | 第35-36页 |
| 2.5 目的基因扩增 | 第36-38页 |
| 2.6 PTEN基因片段的酶切 | 第38-39页 |
| 2.7 目的基因与质粒的链接 | 第39页 |
| 2.8 大肠杆菌DH-5α菌株感受态细胞的制备及转化 | 第39-40页 |
| 2.9 阳性克隆的提取和筛选 | 第40-41页 |
| 2.10 阳性克隆的扩增 | 第41-42页 |
| 2.11 阳性克隆的鉴定 | 第42-43页 |
| 2.12 骨肉瘤U2-OS细胞株的培养 | 第43-44页 |
| 2.13 质粒载体的转染 | 第44页 |
| 2.14 检测转染后U2-OS细胞PTEN mRNA的表达 | 第44-45页 |
| 2.15 检测转染后U2-OS细胞PTEN蛋白的表达 | 第45-47页 |
| 3. 数据处理 | 第47页 |
| 4. 结果 | 第47-53页 |
| 4.1 淋巴细胞的总RNA纯度和含量 | 第47-49页 |
| 4.2 阳性克隆的筛选及鉴定结果 | 第49页 |
| 4.3 PTEN基因的序列分析 | 第49页 |
| 4.4 p-EGFP-N1-PTEN载体转染U2-OS细胞后荧光蛋白的表达 | 第49-50页 |
| 4.5 PTEN mRNA的表达检测结果 | 第50-51页 |
| 4.6 PTEN蛋白质的表达检测结果 | 第51-53页 |
| 第三部分 PTEN基因对骨肉瘤U2-OS细胞的粘附、侵袭及迁移的影响 | 第53-69页 |
| 1. 材料与方法 | 第53-54页 |
| 1.1 质粒载体和骨肉瘤U2-OS细胞株 | 第53页 |
| 1.2 实验试剂 | 第53页 |
| 1.3 溶液的配制 | 第53-54页 |
| 1.4 实验仪器 | 第54页 |
| 2. 实验步骤 | 第54-59页 |
| 2.1 骨肉瘤U2-OS细胞株的培养 | 第54页 |
| 2.2 质粒载体的转染 | 第54页 |
| 2.3 骨肉瘤U2-OS细胞粘附实验 | 第54-55页 |
| 2.4 骨肉瘤U2-OS细胞迁移实验 | 第55页 |
| 2.5 骨肉瘤U2-OS细胞侵袭实验 | 第55-56页 |
| 2.6 收集细胞,分别检测转染后各组细胞中相关分子mRNA的表达 | 第56页 |
| 2.7 收集细胞,分别检测转染后各组细胞中相关分子蛋白质的表达 | 第56-59页 |
| 3 数据处理 | 第59页 |
| 4. 结果 | 第59-65页 |
| 4.1 转染后各组细胞的粘附率 | 第59-60页 |
| 4.2 转染后各组细胞的迁移活性 | 第60-61页 |
| 4.3 转染后各组细胞的侵袭活性 | 第61-62页 |
| 4.4 转染后各组细胞中PTEN,MMP-2和MMP-9 mRNA的表达 | 第62-63页 |
| 4.5 转染后各组细胞PTEN,MMP-2,MMP-9,FAK,p-FAK蛋白的表达 | 第63-65页 |
| 5. 讨论 | 第65-69页 |
| 5.1 本课题的研究意义 | 第65页 |
| 5.2 抑癌基因PTEN与肿瘤的相关性 | 第65-67页 |
| 5.3 PTEN在骨肉瘤中的表达及其对相关分子表达的影响 | 第67-69页 |
| 5.4 存在的问题和进一步研究设想 | 第69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 本研究的创新点 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 附录 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 综述：抑癌基因PTEN与骨肉瘤相关的研究进展 | 第83-100页 |
| 1. 骨肉瘤的诊治与研究现状 | 第83-84页 |
| 2. PTEN基因与肿瘤发生、发展的关系 | 第84-85页 |
| 3. PTEN在骨肉瘤细胞中的表达 | 第85-86页 |
| 4. PTEN的生物学活性 | 第86-91页 |
| 5. 问题与展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
