| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 乳腺的发育及泌乳 | 第11页 |
| 1.2 奶牛乳蛋白合成及调控 | 第11-15页 |
| 1.2.1 奶牛乳蛋白合成的机制及影响因素 | 第12页 |
| 1.2.2 奶牛乳蛋白合成信号通路相关研究 | 第12-15页 |
| 1.3 ELP4相关研究 | 第15-17页 |
| 1.4 氨基酸对泌乳的调节作用 | 第17页 |
| 1.5 氨酰t RNA合成酶的相关研究 | 第17-19页 |
| 1.5.1 氨酰t RNA合成酶的结构与功能 | 第17-19页 |
| 1.5.2 甘氨酰t RNA合成酶相关研究 | 第19页 |
| 1.6 NFκB1相关研究 | 第19-20页 |
| 1.7 实验目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验动物与细胞 | 第22页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第22-24页 |
| 2.2 奶牛乳腺上皮细胞的培养纯化与鉴定 | 第24-27页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的冻存及复苏 | 第26-27页 |
| 2.3 泌乳模型的建立 | 第27-29页 |
| 2.3.1 q RT-PCR检测添加八种必需氨基酸后CSN2的表达 | 第27-28页 |
| 2.3.2 WB检测添加Met后CSN2的表达 | 第28-29页 |
| 2.4 ELP4在奶牛乳腺上皮细胞中的表达 | 第29-32页 |
| 2.4.1 WB检测添加蛋氨酸泌乳模型中ELP4的表达 | 第29页 |
| 2.4.2 奶牛ELP4基因真核表达载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.4.3 ELP4过表达后对CSN2的影响 | 第31-32页 |
| 2.5 Gly RS通过ELP4调控奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的合成 | 第32-38页 |
| 2.5.1 免疫共沉淀分析ELP4与GlyRS相互作用 | 第32-34页 |
| 2.5.2 荧光能量共振转移（FRET）分析ELP4与Gly RS的相互作用 | 第34-35页 |
| 2.5.3 定量免疫共沉淀检测加Met后对ELP4与GlyRS相互作用的影响 | 第35页 |
| 2.5.4 免疫荧光共定位分析蛋氨酸对ELP4与Gly RS相互作用的影响 | 第35页 |
| 2.5.5 Gly RS过表达后CSN2和ELP4的表达 | 第35-36页 |
| 2.5.6 Gly RS抑制后CSN2和ELP4的表达 | 第36页 |
| 2.5.7 Gly RS对p-NFκB1与ELP4启动子结合的影响 | 第36-38页 |
| 2.6 数据分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-57页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞培养与泌乳模型的建立 | 第39-42页 |
| 3.1.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第39-40页 |
| 3.1.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.1.3 体外泌乳模型的建立 | 第41-42页 |
| 3.2 ELP4在奶牛乳腺上皮细胞中的表达 | 第42-46页 |
| 3.2.1 添加蛋氨酸对ELP4表达的影响 | 第42页 |
| 3.2.2 奶牛ELP4基因真核表达载体的构建与鉴定 | 第42-45页 |
| 3.2.3 ELP4过表达后对CSN2的影响 | 第45-46页 |
| 3.3 Gly RS通过ELP4调控奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的合成 | 第46-57页 |
| 3.3.1 免疫共沉淀（Co-IP）分析ELP4与Gly RS的相互作用 | 第46-47页 |
| 3.3.2 荧光能量共振转移（FRET）分析ELP4与Gly RS的相互作用 | 第47-51页 |
| 3.3.3 蛋氨酸对CSN2、ELP4与Gly RS的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.4 定量Co-IP分析蛋氨酸对ELP4与Gly RS相互作用的影响 | 第52页 |
| 3.3.5 免疫荧光共定位分析蛋氨酸对ELP4与Gly RS相互作用的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.6 Gly RS过表达对ELP4的影响 | 第53页 |
| 3.3.7 Gly RS 抑制对 ELP4 和 CSN2 的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.8 Gly RS对p-NFκB1与ELP4启动子结合的影响 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养、纯化、鉴定以及加蛋氨酸泌乳模型的建立 | 第57-58页 |
| 4.2 ELP4与奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的关系 | 第58页 |
| 4.3 Gly RS通过ELP4对CSN2合成的调控 | 第58-59页 |
| 4.4 ELP4和Gly RS与p-NFκB1的关系 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第71页 |
