| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 Xist对细胞重编程影响的研究进展 | 第11-17页 |
| 1 Xist基因结构概述 | 第11-12页 |
| 2 XistRNA对细胞重编程影响的研究进展 | 第12-14页 |
| 2.1 Xist RNA与X染色体的失活/重活化的关系 | 第12-13页 |
| 2.2 Xist RNA对细胞重编程的影响 | 第13-14页 |
| 2.2.1 Xist RNA参与细胞重编程网络调控 | 第13-14页 |
| 2.2.2 Xist RNA对体外建立的体细胞重编程的影响 | 第14页 |
| 3 Xist第一内含子对细胞重编程影响的研究进展 | 第14-15页 |
| 4 展望 | 第15-17页 |
| 第二部分 实验研究 | 第17-47页 |
| 第一章 R6-MEF细胞系的建立 | 第17-29页 |
| 1 实验材料 | 第17-18页 |
| 1.1 实验细胞及载体 | 第17页 |
| 1.2 实验试剂 | 第17-18页 |
| 1.3 实验器材 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-22页 |
| 2.1 小鼠胎儿成纤维细胞的培养 | 第18-19页 |
| 2.1.1 小鼠胎儿成纤维细胞培养液配置 | 第18页 |
| 2.1.2 小鼠胎儿成纤维细胞的解冻、传代与冻存 | 第18-19页 |
| 2.2 R6载体的扩增和提纯 | 第19-20页 |
| 2.3 R6-MEF细胞的制备 | 第20-22页 |
| 2.3.1 小鼠胎儿成纤维细胞的脂质体转染 | 第20-21页 |
| 2.3.2 R6-MEF细胞的培养 | 第21-22页 |
| 3 实验结果 | 第22-27页 |
| 3.1 R6载体的结构及其结合位点 | 第22页 |
| 3.2 R6-MEF细胞系的建立 | 第22-25页 |
| 3.3 M15培养液中维持R6-MEF生长的有效因子 | 第25-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第二章 R6-MEF细胞系的鉴定 | 第29-47页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| 1.1 实验细胞 | 第29页 |
| 1.2 实验试剂 | 第29-30页 |
| 1.3 实验器材 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.1 R6-MEF细胞系生长特性的测定 | 第30页 |
| 2.2 R6-MEF细胞多能性基因表达检测 | 第30-34页 |
| 2.2.1 R6-MEF细胞RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2 R6-MEF细胞cDNA的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.3 R6-MEF细胞的实时荧光定量PCR | 第32-34页 |
| 2.3 R6-MEF细胞的免疫荧光染色 | 第34-35页 |
| 2.4 R6-MEF细胞的核型分析 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-44页 |
| 3.1 R6-MEF细胞生长曲线的测定 | 第36-38页 |
| 3.2 R6-MEF细胞多能性基因表达检测 | 第38-39页 |
| 3.3 R6-MEF细胞的免疫荧光染色(NANOG) | 第39-41页 |
| 3.4 R6-MEF细胞的GOF-GFP表达检测 | 第41-43页 |
| 3.5 R6-MEF细胞的H3K27me3检测 | 第43页 |
| 3.6 R6-ME细胞的核型分析 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
