| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-31页 |
| 1.1 纳米载体基因输送技术 | 第15-20页 |
| 1.1.1 纳米基因载体 | 第15-17页 |
| 1.1.2 纳米载体介导的细胞转化 | 第17-20页 |
| 1.2 磁性纳米基因载体 | 第20-24页 |
| 1.2.1 磁性纳米基因载体的特点 | 第20-21页 |
| 1.2.2 磁性纳米基因载体的制备与功能修饰 | 第21-24页 |
| 1.3 磁性纳米载体用于转基因的研究 | 第24-28页 |
| 1.3.1 磁性纳米基因载体的输送原理 | 第25-26页 |
| 1.3.2 磁性纳米载体与其他转化方法结合 | 第26-27页 |
| 1.3.3 磁性纳米载体与多基因转化 | 第27-28页 |
| 1.4 本论文的研究内容、目的和意义 | 第28-31页 |
| 1.4.1 研究目的和意义 | 第28-29页 |
| 1.4.2 研究内容和方法 | 第29-31页 |
| 第二章 磁性纳米基因载体系统的构建与表征 | 第31-43页 |
| 2.1 实验仪器和试剂 | 第32页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第32页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-34页 |
| 2.2.1 质粒DNA的提取与纯化 | 第32页 |
| 2.2.2 纳米载体-基因复合物的构建 | 第32页 |
| 2.2.3 粒度分布及Zeta电位分析 | 第32-33页 |
| 2.2.4 傅立叶红外光谱分析 | 第33页 |
| 2.2.5 原子力显微镜观测 | 第33页 |
| 2.2.6 扫描电子显微镜观测 | 第33页 |
| 2.2.7 透射电子显微镜观测 | 第33页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验 | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第34-41页 |
| 2.3.1 磁性纳米颗粒表征 | 第34页 |
| 2.3.2 磁性纳米基因载体系统表征 | 第34-39页 |
| 2.3.3 磁性纳米载体-基因复合物系统对DNA的负载和保护能力分析 | 第39-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-42页 |
| 2.5 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 磁性纳米基因载体介导的动物细胞转化 | 第43-56页 |
| 3.1 实验仪器和试剂 | 第44页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第44页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 3.2.1 PK15细胞的培养、传代与冻存 | 第44-45页 |
| 3.2.2 纳米载体-基因复合物的制备 | 第45页 |
| 3.2.3 粒度分布及Zeta电位分析 | 第45页 |
| 3.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第45页 |
| 3.2.5 PK15细胞的磁转染 | 第45-46页 |
| 3.2.6 PK15细胞的双基因磁转染 | 第46页 |
| 3.2.7 PK15细胞的荧光示踪实验 | 第46页 |
| 3.2.8 流式细胞分析 | 第46页 |
| 3.2.9 MTT法细胞毒性实验 | 第46页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第46-54页 |
| 3.3.1 PK15细胞的磁转染 | 第46-48页 |
| 3.3.2 剂量-效应关系分析 | 第48-50页 |
| 3.3.3 荧光示踪 | 第50-51页 |
| 3.3.4 细胞毒性分析 | 第51-52页 |
| 3.3.5 细胞双基因转化 | 第52-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 磁性纳米基因载体介导的棉花遗传转化 | 第56-84页 |
| 4.1 实验仪器和试剂 | 第58页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第58页 |
| 4.1.2 实验试剂与材料 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-67页 |
| 4.2.1 质粒DNA的提取与纯化 | 第58-59页 |
| 4.2.2 纳米载体-基因复合物的构建 | 第59页 |
| 4.2.3 粒度分布及Zeta电位分析 | 第59页 |
| 4.2.4 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验 | 第59页 |
| 4.2.5 扫描电子显微镜观测 | 第59页 |
| 4.2.6 透射电子显微镜观测 | 第59页 |
| 4.2.7 花粉磁转染 | 第59-60页 |
| 4.2.8 花粉离体培养 | 第60页 |
| 4.2.9 定位分析和荧光示踪 | 第60页 |
| 4.2.10瞬时表达 | 第60页 |
| 4.2.11田间授粉和获得棉花转基因植株 | 第60-61页 |
| 4.2.12棉花基因组提取 | 第61-62页 |
| 4.2.13 PCR检测 | 第62-63页 |
| 4.2.14 Southern blot分析 | 第63-66页 |
| 4.2.15 ELISA检测 | 第66页 |
| 4.2.16 叶片接虫实验 | 第66-67页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第67-82页 |
| 4.3.1 花粉磁转染 | 第67-69页 |
| 4.3.2 磁性纳米基因载体系统表征 | 第69-72页 |
| 4.3.3 花粉活力测定 | 第72-73页 |
| 4.3.4 MNP/DNA复合物在花粉和花粉管中的定位检测和荧光示踪 | 第73-75页 |
| 4.3.5 GUS基因在花粉中的表达 | 第75页 |
| 4.3.6 转基因抗虫棉花植株的获得及分子检测 | 第75-79页 |
| 4.3.7 T1、T2和T3代转基因遗传稳定性分析 | 第79-80页 |
| 4.3.8 ELISA检测T3代转基因棉花植株抗虫蛋白的表达 | 第80-82页 |
| 4.3.9 T3代转基因棉花植株叶片的接虫实验 | 第82页 |
| 4.4 讨论 | 第82-83页 |
| 4.5 小结 | 第83-84页 |
| 第五章 全文结论 | 第84-87页 |
| 5.1 结论与展望 | 第84-86页 |
| 5.2 创新点 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 作者简历 | 第97页 |
