| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 PED的起源与发展 | 第13页 |
| 1.2 PED流行病学 | 第13-15页 |
| 1.2.1 全球PED流行病学 | 第13-14页 |
| 1.2.2 中国PED流行病学 | 第14-15页 |
| 1.3 PEDV的分子病原学 | 第15-18页 |
| 1.3.1 PEDV的分类地位 | 第15页 |
| 1.3.2 PEDV的结构和基因组 | 第15-16页 |
| 1.3.3 PEDV编码的结构蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3.4 PEDV的生物与理化性质 | 第17-18页 |
| 1.3.5 PEDV的分离与细胞培养 | 第18页 |
| 1.4 冠状病毒S蛋白研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5 疫苗研究现状 | 第19-20页 |
| 1.5.1 灭活疫苗 | 第19页 |
| 1.5.2 弱毒疫苗 | 第19-20页 |
| 1.5.3 基因工程疫苗 | 第20页 |
| 1.5.4 乳酸杆菌疫苗 | 第20页 |
| 1.6 杆状病毒表达载体系统（BEVS）概述 | 第20-22页 |
| 1.6.1 BEVS的起源与发展 | 第20-21页 |
| 1.6.2 BEVS的特性 | 第21-22页 |
| 1.6.3 BEVS的优势 | 第22页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 PEDV S基因的遗传变异分析 | 第24-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-28页 |
| 2.1.1 主要试剂、耗材及仪器 | 第25页 |
| 2.1.2 病料的采集与处理 | 第25页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.1.4 PEDV阳性检测 | 第26页 |
| 2.1.5 S基因的克隆及测序 | 第26-27页 |
| 2.1.6 分子流行病学分析 | 第27-28页 |
| 2.2 结果 | 第28-35页 |
| 2.2.1 腹泻样品的PEDV阳性检测 | 第28-30页 |
| 2.2.2 PEDV S基因的分段扩增及序列测定结果 | 第30页 |
| 2.2.3 PEDV S基因序列同源性分析 | 第30-31页 |
| 2.2.4 PEDV S基因编码的氨基酸序列分析 | 第31-33页 |
| 2.2.5 PEDV S基因序列进化树分析 | 第33-35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 PEDV S蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定 | 第36-47页 |
| 3.1 材料和方法 | 第37-40页 |
| 3.1.1 质粒、菌株和细胞株 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂、耗材及仪器 | 第37页 |
| 3.1.3 S1基因的扩增 | 第37-38页 |
| 3.1.4 转座载体的构建 | 第38页 |
| 3.1.5 DH10Bac感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 3.1.6 阳性重组穿梭质粒的筛选 | 第38页 |
| 3.1.7 转染 | 第38-39页 |
| 3.1.8 rBac-S1-P1的病毒滴度测定 | 第39页 |
| 3.1.9 rBac-S1-P1重组病毒感染后的CPE观察 | 第39页 |
| 3.1.10 rBac-S1-P1重组病毒感染后的IFA鉴定 | 第39页 |
| 3.1.11 重组病毒的传代与病毒滴度测定 | 第39-40页 |
| 3.1.12 病毒传代后感染细胞的IFA鉴定 | 第40页 |
| 3.1.13 目的蛋白的SDS-PAGE及western blot鉴定 | 第40页 |
| 3.2 结果 | 第40-45页 |
| 3.2.1 pFastBacHTA-S1重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.2 重组穿梭质粒rBacmid-S1的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.3 转染后 72h的细胞病变 | 第42页 |
| 3.2.4 rBac-S1-P1重组病毒感染后的CPE观察 | 第42-43页 |
| 3.2.5 rBac-S1-P1重组病毒感染后的IFA鉴定 | 第43页 |
| 3.2.6 不同代次重组病毒滴度测定 | 第43-44页 |
| 3.2.7 病毒传代后感染细胞的IFA鉴定 | 第44页 |
| 3.2.8 病毒传代后感染细胞的IFA鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 猪流行性腹泻病毒S蛋白单克隆抗体的制备 | 第47-53页 |
| 4.1 材料和方法 | 第47-50页 |
| 4.1.1 毒株、细胞和实验动物 | 第47-48页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第48页 |
| 4.1.3 病毒的纯化 | 第48页 |
| 4.1.4 小鼠的免疫 | 第48页 |
| 4.1.5 细胞融合 | 第48-49页 |
| 4.1.6 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第49页 |
| 4.1.7 阳性杂交瘤细胞株的克隆纯化 | 第49页 |
| 4.1.8 单克隆抗体的间接免疫荧光检测 | 第49-50页 |
| 4.1.9 杂交瘤细胞的克隆和冻存 | 第50页 |
| 4.2 结果 | 第50-52页 |
| 4.2.1 抗PEDV杂交瘤细胞株的筛选 | 第50-51页 |
| 4.2.2 抗PEDV S1蛋白单克隆抗体的鉴定 | 第51-52页 |
| 4.3 讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 全文结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
