缩略词表 | 第5-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
英文摘要 | 第9-10页 |
前言 | 第11-13页 |
材料与方法 | 第13-22页 |
1. 材料 | 第13-15页 |
1.1 标本与临床资料 | 第13页 |
1.2 引物合成及序列测定 | 第13页 |
1.3 菌株与细胞株 | 第13页 |
1.4 质粒与慢病毒颗粒 | 第13页 |
1.5 常用分子生物学试剂盒 | 第13-14页 |
1.6 细胞培养试剂 | 第14页 |
1.7 主要试剂和化学试剂 | 第14页 |
1.8 抗体 | 第14页 |
1.9 主要实验仪器 | 第14-15页 |
2. 方法 | 第15-22页 |
2.1 重组质粒的构建、提取和鉴定 | 第15-16页 |
2.2 哺乳动物细胞的瞬时转染 | 第16页 |
2.3 慢病毒的包装 | 第16页 |
2.4 哺乳动物细胞稳定克隆的制备 | 第16页 |
2.5 嘌呤霉素筛选细胞浓度的确立 | 第16-17页 |
2.6 CCK8试剂测定细胞生长曲线试验 | 第17页 |
2.7 克隆形成实验 | 第17页 |
2.8 流式细胞仪检测细胞周期 | 第17页 |
2.9 Annexin V-FITC PI双染色方法检测细胞凋亡 | 第17-18页 |
2.10 细胞划痕实验 | 第18页 |
2.11 细胞Transwell实验 | 第18页 |
2.12 Western-Blot实验 | 第18-19页 |
2.13 实时荧光定量(Real-time)RT-PCR | 第19-20页 |
2.14 转录激活活性测定 | 第20页 |
2.15 半衰期检测 | 第20页 |
2.16 免疫组化 | 第20-21页 |
2.17 裸鼠成瘤实验 | 第21页 |
2.18 统计学析 | 第21-22页 |
结果 | 第22-57页 |
第一部分 临床标本观察 | 第22-27页 |
1. 靶基因HPIP蛋白在肠癌组织和癌旁的表达差异 | 第22页 |
2. HPIP蛋白表达与肠癌患者预后的关系 | 第22-26页 |
3. 验证HPIP抗体的特异性 | 第26-27页 |
第二部分 细胞试验观察HPIP在肠癌中的功能及机制 | 第27-54页 |
1. HPIP促进了肠癌细胞的增殖 | 第27-34页 |
1.1 HPIP在肠癌细胞株的表达 | 第27页 |
1.2 HCT-116,HCT-8,SW480细胞的转染效率 | 第27-28页 |
1.3 过表达HPIP促进肠癌细胞增殖,敲低HPIP抑制肠癌细胞增殖 | 第28-32页 |
1.4 结晶紫染色平板克隆实验观察HPIP蛋白对细胞生长的影响 | 第32-34页 |
2. HPIP蛋白影响肠癌细胞周期进程 | 第34-41页 |
2.1 HPIP蛋白促进结肠癌细胞从G0/G1期向S期转化,缩短G2/M期 | 第34-36页 |
2.2 HPIP蛋白改变了肠癌细胞G1/S、G2/M周期相关蛋白的表达 | 第36-41页 |
3. HPIP抑制肠癌细胞的凋亡 | 第41-44页 |
3.1 HPIP抑制肠癌细胞的凋亡率 | 第41-42页 |
3.2 HPIP改变了凋亡相关蛋白BCL-2、Bax、Pig-3 的表达 | 第42-44页 |
4. HPIP促进肠癌细胞的迁移和侵袭能力 | 第44-49页 |
4.1 HPIP促进肠癌细胞的迁移能力 | 第44页 |
4.2 HPIP促进肠癌细胞的侵袭能力 | 第44页 |
4.3 HPIP促进肠癌上皮细胞向间质(EMT)的转换 | 第44-49页 |
5. HPIP促进肠癌细胞的生长、迁移和EMT是通过激活MAPK、AKT通路 | 第49-54页 |
第三部分 动物模型观察HPIP对裸鼠移植瘤生长的影响 | 第54-57页 |
1. 敲低 HPIP 表达抑制裸鼠移植瘤的生长 | 第54页 |
2. 敲低HPIP表达抑制了增殖、转移相关蛋白的表达 | 第54-57页 |
讨论 | 第57-59页 |
结论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-63页 |
综述 | 第63-73页 |
参考文献 | 第68-73页 |
个人简历 | 第73-74页 |
致谢 | 第74页 |