| 英文缩略词表（Abbreviation） | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 一、前言 | 第19-22页 |
| 二、实验 | 第22-59页 |
| 实验一 PGE2对滑膜细胞功能的影响及CP-25 的作用 | 第22-40页 |
| 1. 实验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 细胞 | 第22页 |
| 1.2 药物 | 第22页 |
| 1.3 试剂 | 第22-23页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.1 Western blot法检测正常人成纤维样滑膜细胞（FLS）和RA患者滑膜细胞株（MH7A）中EP4和GRK2的总表达和胞浆胞膜表达 | 第24-27页 |
| 2.1.1 正常人FLS、MH7A全蛋白及胞浆胞膜蛋白的提取 | 第24页 |
| 2.1.2 蛋白质定量（BCA法） | 第24-25页 |
| 2.1.3 Western blot法 | 第25-27页 |
| 2.2 CCK-8 法检测正常人FLS、MH7A细胞增殖活性 | 第27-28页 |
| 2.3 流式细胞术检测MH7A EP4受体的表达 | 第28页 |
| 2.4 免疫共沉淀法（Co-immunoprecipitation, Co-IP）检测MH7A细胞中GRK2与EP4的共表达情况 | 第28-29页 |
| 2.5 FRET检测MH7A细胞cAMP和PKA活性的变化 | 第29页 |
| 2.6 统计学分析 | 第29-30页 |
| 3. 结果 | 第30-39页 |
| 3.1 PGE2，TNF-α 对正常人FLS增殖活性的影响 | 第30-33页 |
| 3.1.1 PGE2对正常人FLS增殖的影响 | 第30页 |
| 3.1.2 TNF-α 对正常人FLS增殖的影响 | 第30-31页 |
| 3.1.3 TNF-α 联合PGE2对正常人FLS增殖的影响 | 第31-32页 |
| 3.1.4 TNF-α 联合PGE2对正常人FLS的EP4和GRK2胞膜表达的影响 | 第32-33页 |
| 3.2 PGE2对MH7A增殖及EP4与GRK2共表达的影响及CP-25 的作用 | 第33-38页 |
| 3.2.1 PGE2对MH7A增殖的影响及CP-25 的作用 | 第33-34页 |
| 3.2.2 PGE2对MH7A不同时间点EP4和GRK2总表达影响 | 第34页 |
| 3.2.3 PGE2对MH7A不同时间点EP4和GRK2胞膜表达的影响 | 第34-36页 |
| 3.2.4 CP-25 对PGE2诱导的MH7A中EP4和GRK2胞膜表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.5 PGE2对MH7A EP4和GRK2的共表达的影响及CP-25 的作用 | 第37-38页 |
| 3.3 EP4受体激动剂对MH7A中PGE2信号通路中cAMP-PKA活性的影响及CP-25 的作用 | 第38-39页 |
| 4. 小结 | 第39-40页 |
| 实验二 EP4受体激动剂调节EP4受体脱敏及CP-25 的作用机制 | 第40-59页 |
| 1. 实验材料 | 第40-42页 |
| 1.1 细胞 | 第40页 |
| 1.2 药物 | 第40页 |
| 1.3 试剂 | 第40-41页 |
| 1.4 仪器和设备 | 第41-42页 |
| 2. 实验方法 | 第42-49页 |
| 2.1 人HEK293细胞培养和转染 | 第42-43页 |
| 2.2 荧光显微镜观察转染效果 | 第43页 |
| 2.3 蛋白提取与免疫印迹 | 第43-44页 |
| 2.4 Co-IP检测HEK293细胞中GRK2与EP4的共表达情况 | 第44页 |
| 2.5 GRK2突变质粒的构建 | 第44-48页 |
| 2.5.1 LB固体培基配方（1000ml） | 第44-45页 |
| 2.5.2 引物序列 | 第45页 |
| 2.5.3 pIRES-EGFP-GRK2-mut质粒的构建 | 第45-48页 |
| 2.6 统计学分析 | 第48-49页 |
| 3. 结果 | 第49-58页 |
| 3.1 构建的GRK2突变质粒 | 第49-53页 |
| 3.1.1 pGEM-T-GRK-C340S和pGEM-T-GRK-S670A的扩增 | 第49-50页 |
| 3.1.2 pEGFP-C3-GRK2-C340S和pEGFP-C3-GRK2-S670A突变质粒的构建和鉴定 | 第50-51页 |
| 3.1.3 pIRES-EGFP-GRK2-C340S和pIRES-EGFP-GRK2-S670A突变质粒的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| 3.1.4 GRK2相关质粒转染人HEK293细胞的表达情况（荧光显微镜） | 第52页 |
| 3.1.5 GRK2相关质粒转染人HEK293细胞的表达情况（Western blot法） | 第52-53页 |
| 3.2 EP4受体激动剂对转染GRK2-wt质粒的HEK293细胞中EP4和GRK2共表达的影响及CP-25 的作用 | 第53-54页 |
| 3.3 EP4受体激动剂对转染GRK2-C340S突变质粒的HEK293细胞中EP4和GRK2共表达的影响及CP-25 的作用 | 第54-55页 |
| 3.4 EP4受体激动剂对转染GRK2-S670A突变质粒的HEK293细胞中EP4和GRK2共表达的影响及CP-25 的作用 | 第55-56页 |
| 3.5 EP4受体激动剂对过表达GRK2的HEK293细胞中GRK2的685位磷酸化的影响及CP-25的作用 | 第56-58页 |
| 4. 小结 | 第58-59页 |
| 三、讨论 | 第59-64页 |
| 1. PGE2促进 FLS异常增殖，可能与其调节GRK2转膜，导致EP4受体脱敏有关 | 第59-61页 |
| 2. CP-25抑制FLS异常增殖，可能与其调控GRK2过度活化有关 | 第61-64页 |
| 四、结论 | 第64页 |
| 五、下步工作设想 | 第64-66页 |
| 六、参考文献 | 第66-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-78页 |
| 综述 | 第78-98页 |
| 参考文献 | 第93-98页 |
