| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 植物对低温的响应 | 第14-15页 |
| 1.2 CRT/DRE顺式作用元件和CBF ( DREB1 ) 基因家族 | 第15-17页 |
| 1.3 CBF激活转录的分子机制 | 第17页 |
| 1.4 CBF基因家族的表达调控 | 第17-19页 |
| 1.5 CBF途径在植物基因工程中的应用 | 第19-20页 |
| 1.6 研究意义、内容和技术路线 | 第20-22页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第20页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.6.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 CsCBF2转基因烟草的表达验证 | 第22-33页 |
| 前言 | 第22页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试验仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.3 试验试剂及配制方法 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 转基因烟草基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 转基因烟草DNA的纯化 | 第24页 |
| 2.2.3 转基因烟草PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.4 转基因烟草总RNA提取 | 第25页 |
| 2.2.5 转基因烟草RNA反转录反应及RT-PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.6 转基因烟草蛋白质提取 | 第26-27页 |
| 2.2.7 烟草蛋白质浓度测定 | 第27页 |
| 2.2.8 Western blot技术 | 第27-28页 |
| 2.2.9 CsCBF2转基因烟草的生长抑制研究 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.3.1 CsCBF2转基因烟草PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.3.2 CsCBF2转基因烟草RT-PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.3.3 CsCBF2转基因烟草Western blot检测 | 第30页 |
| 2.3.4 CsCBF2基因表达对转基因烟草的生长抑制 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 过表达CsCBF2转基因烟草抗逆性研究 | 第33-48页 |
| 前言 | 第33页 |
| 3.1 试验材料 | 第33-36页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第33页 |
| 3.1.2 试验仪器设备 | 第33页 |
| 3.1.3 试验试剂及配制方法 | 第33-36页 |
| 3.2 试验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 转基因烟草种子消毒 | 第36页 |
| 3.2.2 转基因烟草种子发芽率检测 | 第36页 |
| 3.2.3 转基因烟草高盐和甘露醇处理 | 第36-37页 |
| 3.2.4 转基因烟草低温处理 | 第37页 |
| 3.2.5 转基因烟草存活率检测 | 第37页 |
| 3.2.6 转基因烟草电解质外渗率检测 | 第37页 |
| 3.2.7 转基因烟草可溶糖和脯氨酸含量测定 | 第37-38页 |
| 3.3 结果分析 | 第38-46页 |
| 3.3.1 高盐和脱水胁迫对转基因烟草发芽率的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.2 高盐和脱水胁迫对转基因烟草根长长度和鲜重的影响 | 第39-41页 |
| 3.3.3 低温胁迫对转基因烟草根长长度和鲜重的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.4 低温胁迫对转基因烟草存活率的影响 | 第43-45页 |
| 3.3.5 低温胁迫对转基因烟草电解质外渗率的影响 | 第45页 |
| 3.3.6 低温胁迫对转基因烟草可溶性糖和脯氨酸含量的影响 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 CsCBF2转基因烟草差异基因表达谱特征分析 | 第48-60页 |
| 前言 | 第48页 |
| 4.1 试验材料 | 第48页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 4.1.2 实验仪器设备 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 4.2.1 上机测序 | 第48-49页 |
| 4.2.2 数据评估 | 第49-50页 |
| 4.2.3 转录组的de novo组装和转录本的长度分布 | 第50页 |
| 4.2.4 基因功能注释 | 第50页 |
| 4.2.5 差异基因统计分析 | 第50页 |
| 4.2.6 差异基因GO功能注释 | 第50-51页 |
| 4.2.7 差异基因KEGG注释 | 第51页 |
| 4.3 结果分析 | 第51-58页 |
| 4.3.1 转录组质量评估 | 第51页 |
| 4.3.2 De novo组装结果统计以及转录本长度分布 | 第51-52页 |
| 4.3.3 Unigene基因功能注释 | 第52-53页 |
| 4.3.4 野生型烟草和转基因烟草差异基因表达分析 | 第53-54页 |
| 4.3.5 差异表达基因的GO注释 | 第54-56页 |
| 4.3.6 差异表达基因的KEGG注释 | 第56-57页 |
| 4.3.7 差异表达基因转录因子的分析 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 CsCBF2转基因烟草响应低温调控相关基因挖掘 | 第60-73页 |
| 前言 | 第60页 |
| 5.1 试验材料 | 第60页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第60页 |
| 5.1.2 试验仪器设备 | 第60页 |
| 5.1.3 试验试剂 | 第60页 |
| 5.2 试验方法 | 第60-61页 |
| 5.2.1 烟草共有差异表达基因维恩图 | 第60-61页 |
| 5.2.2 共有差异基因的GO富集分析 | 第61页 |
| 5.2.3 共有差异基因的KEGG分析 | 第61页 |
| 5.2.4 实时荧光定量PCR验证 | 第61页 |
| 5.3 结果分析 | 第61-73页 |
| 5.3.1 转基因烟草不同植株间的差异基因对比 | 第61-62页 |
| 5.3.2 共有差异表达基因的GO富集分析 | 第62-67页 |
| 5.3.3 共有差异表达基因的KEGG富集 | 第67-68页 |
| 5.3.4 实时荧光定量PCR验证 | 第68页 |
| 5.3.5 探究茶树CsCBF2基因的调控途径 | 第68-73页 |
| 第六章 结论 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 攻读学位期间获得与学位论文相关的科研成果目录 | 第84页 |
