| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 课题提出 | 第9-10页 |
| 1.2 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.2.1 马铃薯块茎低温糖化现象 | 第10-11页 |
| 1.2.2 马铃薯块茎低温糖化机理研究 | 第11-14页 |
| 1.2.2.1 马铃薯块茎低温糖化的渗透膜理论 | 第11-12页 |
| 1.2.2.2 碳水化合物代谢与低温糖化 | 第12-13页 |
| 1.2.2.3 ABA与低温糖化 | 第13-14页 |
| 1.2.3 马铃薯低温糖化改良策略 | 第14-15页 |
| 1.2.4 泛素蛋白研究概况 | 第15-18页 |
| 1.2.4.1 泛素-蛋白酶体途径概况 | 第15-16页 |
| 1.2.4.2 RING finger蛋白研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.4.3 泛素化介导的非蛋白质降解功能 | 第17-18页 |
| 1.3 研究目的及内容 | 第18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18-19页 |
| 2.1.2 菌株、质粒和引物 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 马铃薯生理生化指标测定 | 第19-20页 |
| 2.2.1.1 块茎及叶片中葡萄糖、果糖、淀粉含量测定 | 第19-20页 |
| 2.2.1.2 马铃薯块茎中代谢物质含量的测定 | 第20页 |
| 2.2.2 质粒提取与载体的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.2.1 质粒的提取 | 第20页 |
| 2.2.2.2 原核表达载体构建 | 第20-21页 |
| 2.2.2.3 亚细胞定位载体构建 | 第21页 |
| 2.2.3 亚细胞定位 | 第21-22页 |
| 2.2.4 蛋白体外表达、纯化及活性测定 | 第22-24页 |
| 2.2.4.1 蛋白原核表达条件探索 | 第22页 |
| 2.2.4.2 GST融合蛋白的体外表达 | 第22-23页 |
| 2.2.4.3 HIS融合蛋白的体外表达 | 第23页 |
| 2.2.4.4 StAmy23 蛋白的真核表达 | 第23-24页 |
| 2.2.4.5 蛋白活性测定 | 第24页 |
| 2.2.5 SbRFP1 泛素化活性检测 | 第24-27页 |
| 2.2.6 Pull-down | 第27页 |
| 2.2.7 ELISA检测β-淀粉酶的含量 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-51页 |
| 3.1 马铃薯转基因株系表型鉴定 | 第28-37页 |
| 3.1.1 马铃薯转基因株系主要农艺性状分析 | 第28-29页 |
| 3.1.2 转基因株系叶片中淀粉含量测定 | 第29-30页 |
| 3.1.3 转基因株系在低温贮藏中糖和淀粉的测定及油炸品质分析 | 第30-34页 |
| 3.1.4 植株体内SbRFP1 对β-淀粉酶含量的影响 | 第34-35页 |
| 3.1.5 转基因块茎在低温贮藏过程中代谢组分分析 | 第35-37页 |
| 3.2 SbRFP1 调控机制的研究 | 第37-51页 |
| 3.2.1 SbRFP1 基因的亚细胞定位 | 第37-38页 |
| 3.2.1.1 SbRFP1 基因与GFP融合表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.2.1.2 SbRFP1 基因的亚细胞定位 | 第38页 |
| 3.2.2 相关蛋白的表达及活性测定 | 第38-46页 |
| 3.2.2.1 SbRFP1 及SbRFP1(H140T/C150S)的原核表达 | 第38-43页 |
| 3.2.2.2 StBAM1 及StAmy23 的体外表达及活性测定 | 第43-46页 |
| 3.2.3 SbRFP1 的泛素化活性测定 | 第46-47页 |
| 3.2.4 SbRFP1 与淀粉酶及转化酶的互作模式研究 | 第47-49页 |
| 3.2.5 SbRFP1 对淀粉酶及转化酶的活性抑制 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 SbRFP1 能改善马铃薯低温糖化现象 | 第51页 |
| 4.2 SbRFP1 与淀粉酶互作并影响其活性 | 第51-53页 |
| 4.3 研究展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
