| 缩略词 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-21页 |
| 1 调控花期基因研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1 分生组织特异基因API的研究进展 | 第16页 |
| 1.2 植物开花基因FT的研究进展 | 第16-17页 |
| 2 花卉花色基因工程研究进展 | 第17-19页 |
| 2.1 植物类黄酮生物合成及调控研究进展 | 第17-18页 |
| 2.2 黄酮醇合成酶(flavonol synthase,FLS) | 第18页 |
| 2.3 花青素合成酶(anthocyanidin sythase,ANS) | 第18页 |
| 2.4 类黄酮合成相关调控基因 | 第18-19页 |
| 3 RNAi技术研究进展 | 第19页 |
| 4 水仙遗传转化研究进展 | 第19-20页 |
| 4.1 瞬时表达研究进展 | 第20页 |
| 5 本研究科学意义 | 第20-21页 |
| 第二章 中国水仙NtFT、NtAP1、NtANS植物表达载体的构建 | 第21-33页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| 1.1 载体和菌株 | 第21页 |
| 1.2 试剂 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.1 引物的设计和合成 | 第21-22页 |
| 2.2 NtAP1、NtFTF和NtANS基因cDNA全长序列的克隆 | 第22-23页 |
| 2.3 目的片段的回收 | 第23页 |
| 2.4 目的基因连接转化与测序 | 第23页 |
| 2.5 质粒提取 | 第23页 |
| 2.6 质粒酶切 | 第23-24页 |
| 2.7 质粒连接反应 | 第24页 |
| 2.8 重组质粒的鉴定 | 第24页 |
| 3 NtAP1基因植物表达载体构建路线 | 第24-25页 |
| 4 NtFT基因植物表达载体构建路线 | 第25页 |
| 5 NtANS基因植物表达载体构建路线 | 第25-26页 |
| 6 结果与分析 | 第26-32页 |
| 6.1 NtAP1、NtFT和NtANS基因PCR扩增结果 | 第26页 |
| 6.2 重组质粒pC2300-35S-NtAPl-OCS构建结果 | 第26-27页 |
| 6.3 重组质粒 pCAMBIA1301-35S-NtAPl-OCS 构建结果 | 第27-29页 |
| 6.4 重组质粒pC2300-35S-NtFT-OCS构建结果 | 第29-30页 |
| 6.5 重组质粒 pCAMBIA1301-35S-NtFT-(9G5 构建结果 | 第30-31页 |
| 6.6 重组质粒pC2300-35S-NtANS-OCS构建结果 | 第31-32页 |
| 7 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 NtFLS RNAi植物表达载体的构建 | 第33-43页 |
| 1 试验材料 | 第33页 |
| 1.1 植物材料 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-39页 |
| 2.1 总RNA的提取及cDNA合成 | 第35页 |
| 2.2 正反义NtFLS片段的克隆 | 第35-36页 |
| 2.3 目的载体转化大肠杆菌及测序 | 第36页 |
| 2.4 NtFLSRNAi植物表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 2.4.1 pKB-NtFLSRNAi双价植物表达载体的构建方法 | 第36-38页 |
| 2.4.1.1 pKAN-NtFLS载体构建 | 第38页 |
| 2.4.1.2 pKAN-NtFLSRNAi载体构建 | 第38页 |
| 2.4.2 pB1121-NtFLSRNAi双价植物表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.1 NtFLS正义及反义片段的PCR扩增结果 | 第39页 |
| 3.2 pKAN-NtFLSRNAi载体的构建结果 | 第39页 |
| 3.3 pB1121-NtFLSRNAi表达载体的构建结果 | 第39-43页 |
| 第四章 NtAP1、NtFT转化烟草 | 第43-58页 |
| 1 试验材料 | 第43-44页 |
| 1.1 引物 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第43-44页 |
| 1.3 培养基和培养条件 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44-46页 |
| 2.1 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第44页 |
| 2.1.1 含重组质粒的大肠杆菌活化培养及质粒提取 | 第44页 |
| 2.2 活化根癌农杆菌及制备感受态细胞 | 第44-45页 |
| 2.2.1 根癌农杆菌的活化 | 第44-45页 |
| 2.2.2 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| 2.2.3 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第45页 |
| 2.3 重组质粒转化根癌农杆菌后的鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3.1 重组质粒酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 3 烟草遗传转化体系的优化 | 第46页 |
| 3.1 最适合诱导芽培养基的确定 | 第46页 |
| 3.2 抗生素最适选择压的确定 | 第46页 |
| 4 根癌农杆菌介导的NtAP1基因与NtFT基因分别转化烟草 | 第46-47页 |
| 4.1 无菌烟草幼苗的培养 | 第46-47页 |
| 4.1.1 外植体的预培养 | 第46-47页 |
| 4.2 农杆菌侵染液的制备 | 第47页 |
| 5 将含有重组质粒的农杆菌侵染烟草叶片步骤 | 第47页 |
| 5.1 预培养 | 第47页 |
| 5.2 共培养 | 第47页 |
| 5.3 脱菌及选择培养 | 第47页 |
| 5.4 生根培养 | 第47页 |
| 5.5 组培苗的炼苗和移栽 | 第47页 |
| 6 转基因烟草植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| 7 转基因烟草植株主要植物学性状的观测 | 第48页 |
| 8 转基因烟草植株RT-PCR检测 | 第48页 |
| 9 转基因烟草植株的QPCR检测 | 第48-49页 |
| 9.1 转基因烟草植株RNA的提取和逆转录 | 第48-49页 |
| 10 结果与分析 | 第49-56页 |
| 10.1 转化的农杆菌菌株鉴定结果 | 第49-51页 |
| 10.2 烟草遗传转化体系的优化 | 第51页 |
| 10.3 烟草转化结果 | 第51-52页 |
| 10.4 转基因烟草植株的PCR检测结果 | 第52-53页 |
| 10.5 转基因烟草植株RT-PCR检测结果 | 第53-54页 |
| 10.6 抗性植株的实时荧光定量PCR检测结果 | 第54-55页 |
| 10.6.1 抗性烟草植株的RNA提取结果 | 第54-55页 |
| 10.7 转基因烟草植株主要植物学性状的观测结果 | 第55-56页 |
| 11 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 NtAPl、iWiT转化潭州水仙 | 第58-64页 |
| 1 试验材料 | 第58-59页 |
| 1.1 植物材料 | 第58页 |
| 1.2 根癌农杆菌和质粒 | 第58页 |
| 1.3 主要试剂 | 第58页 |
| 1.4 培养基和培养条件 | 第58-59页 |
| 2 试验方法 | 第59页 |
| 2.1 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第59页 |
| 2.1.1 含重组质粒的大肠杆菌活化培养及质粒提取 | 第59页 |
| 2.2 根癌农杆菌的活化及感受态细胞的制备 | 第59页 |
| 2.2.1 根癌农杆菌EHA105的活化 | 第59页 |
| 2.2.2 根癌农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第59页 |
| 2.2.3 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第59页 |
| 2.3 重组质粒转化根癌农杆菌后的鉴定 | 第59页 |
| 2.3.1 重组质粒酶切鉴定 | 第59页 |
| 3 根癌农杆菌介导的重组质粒转化漳州水仙 | 第59页 |
| 3.1 漳州水仙花亭的消毒与接种 | 第59页 |
| 3.2 农杆菌侵染液的制备 | 第59页 |
| 4 转化步骤 | 第59-60页 |
| 4.1 预培养 | 第59页 |
| 4.2 共培养 | 第59-60页 |
| 4.3 延迟筛选培养 | 第60页 |
| 4.4 筛选培养 | 第60页 |
| 4.5 抗性芽的增殖培养 | 第60页 |
| 4.6 生根培养 | 第60页 |
| 5 结果与分析 | 第60-63页 |
| 5.1 转化的农杆菌菌株鉴定结果 | 第60-62页 |
| 5.2 水仙花葶转化结果 | 第62-63页 |
| 6 讨论 | 第63-64页 |
| 第六章 农杆菌介导的水仙花瓣与副冠瞬时表达 | 第64-69页 |
| 1 试验材料 | 第64-65页 |
| 1.1 植物材料 | 第64页 |
| 1.2 根癌农杆菌和质粒 | 第64页 |
| 1.3 主要试剂和仪器 | 第64-65页 |
| 2 试验方法 | 第65-66页 |
| 2.1 表达载体分别转化根癌农杆菌 | 第65页 |
| 2.2 农杆菌渗透液制备 | 第65页 |
| 2.3 注射方案 | 第65页 |
| 2.4 根癌农杆菌注射法介导的瞬时表达系统的建立 | 第65-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 附录：图版和图版说明 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
