| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1 链霉菌及其代谢产物纳他霉素的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1 链霉菌在生物防治中的应用 | 第15页 |
| 1.2 纳他霉素的性质及特点 | 第15-17页 |
| 1.2.1 纳他霉素的发现 | 第15-16页 |
| 1.2.2 纳他霉素的特点 | 第16-17页 |
| 1.3 纳他霉素的拮抗特性及应用 | 第17-18页 |
| 2 链霉菌生防功能的分子改良 | 第18-19页 |
| 2.1 国内外研究动态 | 第18-19页 |
| 2.1.1 诱变法 | 第18页 |
| 2.1.2 同源重组法 | 第18页 |
| 2.1.3 原生质体融合法 | 第18-19页 |
| 2.1.4 接合转移法 | 第19页 |
| 2.2 转几丁质酶chit33基因链霉菌A01的概况 | 第19页 |
| 3 微生物几丁质酶的研究进展 | 第19-23页 |
| 3.1 几丁质酶的发现 | 第19-20页 |
| 3.2 几丁质酶的特点 | 第20-21页 |
| 3.3 几丁质酶在植物病害防治中的应用 | 第21-23页 |
| 3.3.1 几丁质酶的生防机制 | 第21-22页 |
| 3.3.2 几丁质酶的应用 | 第22-23页 |
| 4 几丁质酶和纳他霉素的发酵工艺优化 | 第23-26页 |
| 4.1 响应面设计的原理 | 第23-24页 |
| 4.2 几丁质酶发酵工艺 | 第24-25页 |
| 4.2.1 几丁质酶生产菌株 | 第24页 |
| 4.2.2 几丁质酶的发酵工艺概况 | 第24-25页 |
| 4.3 纳他霉素发酵工艺 | 第25-26页 |
| 4.3.1 纳他霉素生产菌株 | 第25页 |
| 4.3.2 纳他霉素的发酵工艺概况 | 第25-26页 |
| 5 科学问题的提出与本论文研究意义 | 第26-27页 |
| 第二章 转chit33链霉菌工程菌株的筛选 | 第27-39页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1 供试菌株 | 第27页 |
| 1.2 培养基 | 第27-28页 |
| 1.3 主要试剂 | 第28页 |
| 1.4 主要仪器 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-32页 |
| 2.1 链霉菌工程菌培养 | 第28-29页 |
| 2.1.1 培养方法 | 第28-29页 |
| 2.1.2 工程菌菌体干重及孢子数测定方法 | 第29页 |
| 2.2 拮抗物测定 | 第29-32页 |
| 2.2.1 纳他霉素测定 | 第29-30页 |
| 2.2.2 几丁质酶测定（DNS法） | 第30-31页 |
| 2.2.3 还原糖测定 | 第31-32页 |
| 2.3 工程菌筛选 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 3.1 纳他霉素与几丁质酶测定方法 | 第32-35页 |
| 3.1.1 HPLC法测定工程菌发酵液中的纳他霉素含量 | 第32-34页 |
| 3.1.2 紫外分光光度计法测定发酵液中纳他霉素的产量 | 第34页 |
| 3.1.3 发酵液几丁质酶活力的测定 | 第34-35页 |
| 3.1.4 发酵液中还原糖的测定 | 第35页 |
| 3.2 几丁质酶活力测定结果 | 第35-37页 |
| 3.3 纳他霉素产量测定结果 | 第37页 |
| 4 结论与讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 链霉菌A01-chit33CT工程菌株产纳他霉素与几丁质酶发酵工艺的参数筛选 | 第39-56页 |
| 1 材料 | 第39-41页 |
| 1.1 供试菌株 | 第39页 |
| 1.2 培养基 | 第39-40页 |
| 1.3 主要试剂 | 第40页 |
| 1.4 主要仪器 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-44页 |
| 2.1 纳他霉素与几丁质酶活测定方法 | 第41页 |
| 2.2 链霉菌A01-chit33CT工程菌产纳他霉素与几丁质酶的发酵培养基研究 | 第41-43页 |
| 2.2.1 碳源对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第41-42页 |
| 2.2.2 氮源对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第42页 |
| 2.2.3 无机盐对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第42-43页 |
| 2.3 链霉菌A01-chit33CT工程菌产纳他霉素与几丁质酶的发酵条件研究 | 第43-44页 |
| 2.3.1 初始pH的影响 | 第43页 |
| 2.3.2 接种量的影响 | 第43页 |
| 2.3.3 装液量的影响 | 第43页 |
| 2.3.4 温度的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.5 转速的影响 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-54页 |
| 3.1 碳源对链霉菌A01-chit33CT工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第44-48页 |
| 3.1.1 碳源对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第45-46页 |
| 3.1.2 不同葡萄糖浓度对工程菌产纳他霉素的影响 | 第46页 |
| 3.1.3 不同浓度的几丁质粉对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第46-47页 |
| 3.1.4 几丁质粉添加时间对工程菌产纳他霉素和几丁质酶的影响 | 第47-48页 |
| 3.2 氮源对链霉菌A01-chit33CT工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.1 单一氮源对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.2 混合氮源对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第49页 |
| 3.3 无机盐对链霉菌A01-chit33CT工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第49-51页 |
| 3.3.1 磷酸盐对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.2 七水硫酸镁对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.3 碳酸钙对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第51页 |
| 3.4 发酵条件对链霉菌A01-chit33CT工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第51-54页 |
| 3.4.1 初始pH对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.2 接种量对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第52页 |
| 3.4.3 装液量对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.4 温度对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.5 转速对工程菌产纳他霉素与几丁质酶的影响 | 第54页 |
| 4. 结论与讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 响应面法优化链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵工艺的研究 | 第56-75页 |
| 1. 材料 | 第56-57页 |
| 1.1 供试菌株 | 第56页 |
| 1.2 培养基 | 第56页 |
| 1.3 主要试剂 | 第56-57页 |
| 1.4 主要仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| 2.1 响应面法优化链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵工艺 | 第57-59页 |
| 2.1.1 Plackett-Burman实验 | 第57-58页 |
| 2.1.2 最陡爬坡实验 | 第58页 |
| 2.1.3 Box-Behnken design实验 | 第58-59页 |
| 2.2 链霉菌A01-chit33CT工程菌协同产纳他霉素与几丁质酶的诱导条件 | 第59页 |
| 2.3 链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵代谢曲线 | 第59页 |
| 2.4 不同目标产物的培养过程比较 | 第59页 |
| 2.5 7L发酵罐实验 | 第59-60页 |
| 2.5.1 发酵罐操作步骤 | 第59-60页 |
| 2.5.2 发酵罐实验设计 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-74页 |
| 3.1 Plackett-Burman实验 | 第60-62页 |
| 3.2 最陡爬坡实验 | 第62-63页 |
| 3.3 Box-Behnken design实验 | 第63-69页 |
| 3.4 链霉菌A01-chit33CT工程菌协同产纳他霉素与几丁质酶的诱导条件 | 第69-71页 |
| 3.5 链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵代谢曲线研究 | 第71-72页 |
| 3.6 不同培养基发酵产物的比较 | 第72-73页 |
| 3.7 7L发酵罐分批发酵实验 | 第73-74页 |
| 4 结论与讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵液的抑菌与诱抗效果检测 | 第75-87页 |
| 1 材料 | 第75-76页 |
| 1.1 供试菌株与作物品种 | 第75页 |
| 1.2 培养基 | 第75-76页 |
| 1.3 主要试剂 | 第76页 |
| 1.4 主要仪器 | 第76页 |
| 2 方法 | 第76-81页 |
| 2.1 链霉菌A01-chit33CT工程菌chit33基因RT-PCR分析 | 第76-77页 |
| 2.1.1 总RNA的提取 | 第76页 |
| 2.1.2 反转录合成cDNA | 第76-77页 |
| 2.1.3 RT-PCR分析chit33基因在RNA水平上的表达 | 第77页 |
| 2.2 链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵液对番茄灰霉病菌的拮抗作用检测 | 第77-78页 |
| 2.2.1 番茄灰霉病菌的活化 | 第77-78页 |
| 2.2.2 链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵液的准备 | 第78页 |
| 2.2.3 番茄灰霉病菌的接种 | 第78页 |
| 2.3 链霉菌A01-chit33CT工程菌诱导抗性效应及双向电泳检测 | 第78-80页 |
| 2.3.1 蛋白样品的制备 | 第78-79页 |
| 2.3.2 蛋白的裂解及定量 | 第79-80页 |
| 2.4 链霉菌A01-chit33CT工程菌对温室番茄灰霉病的防效检测 | 第80-81页 |
| 2.4.1 链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵液制备 | 第80页 |
| 2.4.2 番茄灰霉病菌接种体的制备 | 第80页 |
| 2.4.3 番茄盆栽苗的培育 | 第80页 |
| 2.4.4 试验设计 | 第80页 |
| 2.4.5 接种及调查 | 第80-81页 |
| 3. 结果与分析 | 第81-85页 |
| 3.1 链霉菌A01-chit33CT工程菌chit33基因表达分析 | 第81-82页 |
| 3.2 链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵液对灰霉菌的抑制实验 | 第82-83页 |
| 3.3 双向电泳检测工程菌发酵液对番茄幼苗蛋白的影响 | 第83-84页 |
| 3.4 链霉菌A01-chit33CT工程菌发酵液温室防病试验 | 第84-85页 |
| 4 结论与讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 总结与展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第97-98页 |
