| 摘要 | 第4-6页 |
| SUMMARY | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 乳腺上皮细胞体外培养研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1 乳腺的结构研究及意义 | 第13-14页 |
| 1.2 乳腺上皮细胞培养发展史 | 第14-15页 |
| 1.3 乳腺上皮细胞培养方法 | 第15页 |
| 1.4 牦牛乳腺上皮细胞体外培养的意义 | 第15-16页 |
| 2 乳腺生物反应器的研究进展 | 第16-18页 |
| 2.1 乳腺生物反应器的概念 | 第16页 |
| 2.2 乳腺生物反应器的特点 | 第16页 |
| 2.3 乳腺生物反应器的应用 | 第16-17页 |
| 2.4 乳腺生物反应器关键技术 | 第17-18页 |
| 2.5 乳腺生物反应器问题和展望 | 第18页 |
| 3 葡萄糖运载体 | 第18-20页 |
| 3.1 葡萄糖运载体家族 | 第18-19页 |
| 3.2 葡萄糖运载体的转运机制 | 第19页 |
| 3.3 葡萄糖运载体与乳腺葡萄糖的摄取 | 第19-20页 |
| 4 EGF和INS | 第20-22页 |
| 4.1 EGF | 第20页 |
| 4.2 INS | 第20-22页 |
| 第二部分 实验研究 | 第22-57页 |
| 实验一 牦牛乳腺上皮细胞体外培养及鉴定 | 第22-31页 |
| 1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 1.1 主要仪器 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂及配制 | 第23-24页 |
| 1.3 乳腺组织样品的采集 | 第24-25页 |
| 1.4 牦牛乳腺上皮细胞的分离及原代培养 | 第25页 |
| 1.5 牦牛乳腺上皮细胞的纯化与传代 | 第25-26页 |
| 1.6 牦牛乳腺上皮细胞的冻存与复苏 | 第26-27页 |
| 1.7 牦牛乳腺上皮细胞的免疫细胞化学鉴定 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-29页 |
| 2.1 牦牛乳腺上皮细胞体外培养的形态学观察 | 第27-28页 |
| 2.2 牦牛乳腺上皮细胞的免疫细胞化学鉴定 | 第28页 |
| 2.3 牦牛乳腺上皮细胞冻存方法的确定 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 4 结论 | 第30-31页 |
| 实验二 牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因的克隆及其在乳腺上皮细胞中的表达 | 第31-48页 |
| 1 材料与方法 | 第32-36页 |
| 1.1 材料 | 第32页 |
| 1.2 试剂和主要仪器 | 第32-33页 |
| 1.3 引物的设计 | 第33页 |
| 1.4 RNA的提取和反转录 | 第33-34页 |
| 1.5 PCR反应与克隆测序 | 第34页 |
| 1.6 生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 1.7 RT-q PCR检测GLUT1、GLUT3和GLUT8基因在乳腺上皮细胞的表达 | 第35页 |
| 1.8 Western-blotting检测GLUT1、GLUT3和GLUT8蛋白在牦牛乳腺上皮细胞中的表达 | 第35-36页 |
| 1.9 间接免疫荧光检测GLUT1、GLUT3和GLUT8蛋白在牦牛乳腺上皮细胞中的分布 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-45页 |
| 2.1 牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因的克隆 | 第36-37页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第37-43页 |
| 2.3 牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因在乳腺上皮细胞中的表达 | 第43页 |
| 2.4 牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8蛋白在乳腺上皮细胞中的表达 | 第43-44页 |
| 2.5 牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8蛋白在乳腺上皮细胞中的分布 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 4 结论 | 第47-48页 |
| 实验三EGF和胰岛素对牦牛乳腺上皮细胞GLUT1表达影响 | 第48-57页 |
| 1 材料与方法 | 第49-51页 |
| 1.1 材料 | 第49页 |
| 1.2 主要仪器和试剂 | 第49页 |
| 1.3 EGF和胰岛素作用乳腺上皮细胞 | 第49页 |
| 1.4 总RNA提取、反转录及PCR扩增 | 第49-50页 |
| 1.5 RT-q PCR检测GLUT1表达 | 第50页 |
| 1.6 Western-blotting检测GLUT1蛋白的表达 | 第50页 |
| 1.7 免疫荧光染色检测GLUT1蛋白的分布 | 第50-51页 |
| 1.8 数据分析 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-54页 |
| 2.1 引物特异性的确定 | 第51页 |
| 2.2 EGF和胰岛素对牦牛乳腺上皮细胞GLUT1m RNA表达的影响 | 第51-52页 |
| 2.3 EGF和胰岛素对牦牛乳腺上皮细胞GLUT1蛋白表达的影响 | 第52-54页 |
| 2.4 GLUT1蛋白在牦牛乳腺上皮细胞分布检测 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 全文总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 导师简介 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69-70页 |
