| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-31页 |
| 1 生物钟的概念 | 第12-14页 |
| 2 授时因子 | 第14-15页 |
| ·光照授时因子 | 第14-15页 |
| ·温度授时因子 | 第15页 |
| ·饮食授时因子 | 第15页 |
| ·磁场授时因子 | 第15页 |
| 3 生物钟基因 | 第15-19页 |
| ·周期蛋白基因 | 第16页 |
| ·永恒蛋白基因 | 第16-17页 |
| ·隐花色素基因 | 第17-18页 |
| ·类脑和肌肉芳香烃受体核转位子基因 | 第18页 |
| ·时钟蛋白基因 | 第18页 |
| ·双时蛋白基因 | 第18-19页 |
| ·旋转蛋白基因 | 第19页 |
| 4 生物钟分子调控信号途径 | 第19-23页 |
| ·果蝇的生物钟环路 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物的生物钟环路 | 第20-21页 |
| ·昆虫的生物钟新环路 | 第21-23页 |
| ·生物钟基因网络作用环路的综合 | 第23页 |
| 5 昆虫生物钟研究现状 | 第23-28页 |
| ·昆虫生物钟基因的进化 | 第24-25页 |
| ·昆虫生物钟基因在脑部的定位 | 第25-28页 |
| 6 家蚕是研究温度授时作用生物钟环路的优良实验动物 | 第28-29页 |
| 7 生物钟研究的前景 | 第29-31页 |
| 第二章 基本实验方法 | 第31-46页 |
| 1 常用材料与试剂 | 第31-34页 |
| ·家蚕品种与大肠杆菌菌种 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·缓冲液和常用溶液 | 第32-33页 |
| ·核酸电泳相关试剂 | 第33页 |
| ·生物信息学资源及分析软件 | 第33-34页 |
| 2 主要仪器设备 | 第34页 |
| 3 基本实验方法 | 第34-46页 |
| ·总RNA 的抽提 | 第34-35页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第35页 |
| ·PCR 扩增反应程序及加样体系 | 第35-36页 |
| ·实时定量PCR（Real time PCR） | 第36页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第36页 |
| ·连接反应 | 第36页 |
| ·感受态细胞制备 | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第37页 |
| ·碱裂解法少量制备质粒DNA | 第37页 |
| ·酶切反应 | 第37页 |
| ·利用5’-Full RACE Kit 扩增5'cDNA 末端（5’RACE） | 第37页 |
| ·3’RACE 扩增3'cDNA 末端结构 | 第37-38页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第38-41页 |
| ·石蜡切片的制备方法 | 第41-43页 |
| ·免疫组化步骤 | 第43-46页 |
| 第三章 家蚕Cry1 和Cry2 基因的克隆与分析 | 第46-55页 |
| 1 材料与方法 | 第46-48页 |
| ·试验材料 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·总RNA 提取 | 第46页 |
| ·克隆ORF 第一条cDNA 链合成 | 第46页 |
| ·5’RACE 和3’RACE PCR cDNA 制备 | 第46-47页 |
| ·基因克隆引物设计 | 第47-48页 |
| ·PCR 反应体系及条件设置 | 第48页 |
| ·Cry1/Cry2 基因的电子表达谱分析 | 第48页 |
| ·生物钟基因Cry1/Cry2 的组织表达分析 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-53页 |
| ·RT-PCR 反应及RACE 酶切鉴定 | 第48-51页 |
| ·Cry1/Cry2 基因的电子表达谱分析 | 第51-52页 |
| ·生物钟基因Cry1/Cry2 的组织表达分析 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| ·家蚕中存在两种类型的Cry 基因 | 第53页 |
| ·Cry1/Cry2 的表达具有组织特异性 | 第53-54页 |
| ·Cry1/Cry2 的表达具有发育时期的特异性 | 第54-55页 |
| 第四章 诱发滞育的温度和光照条件对家蚕胚胎生物钟信号主要基因表达的影响 | 第55-65页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·供试蚕卵及处理方法 | 第55-56页 |
| ·蚕卵样品总RNA 的提取及cDNA 第1 条链的合成 | 第56页 |
| ·基因表达谱分析 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-62页 |
| ·家蚕胚胎发育后期Cry1 基因表达对温度与光照授时因子变化的响应 | 第57-59页 |
| ·家蚕胚胎发育后期Cry2 基因表达对温度与光照授时因子变化的响应 | 第59-60页 |
| ·家蚕胚胎发育后期Per 基因表达对温度与光照授时因子变化的响应 | 第60-61页 |
| ·家蚕胚胎发育后期Tim 基因表达对温度与光照授时因子变化的响应 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| ·家蚕Cry1、Cry2、Per 和Tim 基因是胚胎期的生物钟基因 | 第62-63页 |
| ·滞育诱导光周期是家蚕胚胎发育后期昼夜节律的有效授时因子 | 第63页 |
| ·温度是影响家蚕生物钟的重要授时因子 | 第63-64页 |
| ·利用家蚕研究生物钟的温度与光照授时因子作用机制具有独特优势 | 第64-65页 |
| 第五章 温度和光节律对家蚕成虫生物钟基因Cry1 和Cry2 表达的影响 | 第65-79页 |
| 第一节 温度和光节律对家蚕成虫生物钟基因Cry1 和Cry2 表达的竞争性PCR 分析 | 第65-71页 |
| 1. 试验材料与方法 | 第65-66页 |
| ·供试家蚕为家蚕C108 | 第65-66页 |
| ·总RNA 的提取及cDNA 第1 条链的合成 | 第66页 |
| ·基因表达谱分析 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-71页 |
| ·Cry 基因在不同的光节律下的节律变化 | 第66-69页 |
| ·Cry 在不同的温度节律下的变化 | 第69-71页 |
| 第二节 温度和光节律对家蚕生物钟基因Cry1 和Cry2 定量分析 | 第71-77页 |
| 1 材料与方法 | 第71-72页 |
| ·试验材料与处理方法 | 第71页 |
| ·总RNA 的提取及cDNA 第1 条链的合成 | 第71页 |
| ·基因表达谱分析 | 第71-72页 |
| ·数据处理方法 | 第72页 |
| 2 结果分析 | 第72-77页 |
| ·不同的光节律下Cry 基因的定量分析 | 第72-75页 |
| ·不同温度节律对家蚕生物钟基因Cry1 和Cry2 表达影响的定量分析 | 第75-77页 |
| 第三节 本章讨论 | 第77-79页 |
| 1 家蚕蛾期生物钟的核心振荡器中Cry1 对光节律做出了响应，是核心生物钟的重要成员 | 第77页 |
| 2 Cry1 基因在蚕蛾头部温度节律的调节中发挥着重要的作用，是温度调节的关键基因 | 第77-78页 |
| 3 Cry2 在蛾期的光节律调控的核心振荡器中发挥着重要的作用，可能是Cry1 调节的下游基因，或者是相关联基因 | 第78页 |
| 4 Cry2 基因是温度周期调控中的核心基因，在对温度的响应中发挥着重要的作用 | 第78页 |
| 5 Cry1 和Cry2 对温周期的调控可能处于不同调节环路 | 第78-79页 |
| 第六章 CRY1 和CRY2 的组织定位 | 第79-88页 |
| 第一节 多克隆抗体制备 | 第79-82页 |
| 1 材料与方法 | 第79-81页 |
| ·试验动物的准备 | 第79页 |
| ·抗原制备 | 第79页 |
| ·抗体效价测定试剂配制 | 第79-80页 |
| ·CRY1 和CRY2 多克隆抗体的制备步骤 | 第80页 |
| ·抗体效价测定ELISA 检测操作步骤 | 第80-81页 |
| 2 结果分析 | 第81-82页 |
| ·CRY1 与CRY2 抗原的纯度分析测定结果 | 第81-82页 |
| ·抗体效价 | 第82页 |
| 第二节 CRY1 和CRY2 的组织表达定位 | 第82-87页 |
| 1 试验动物及处理方法 | 第82-83页 |
| ·试验动物 | 第82页 |
| ·处理方法和取材 | 第82-83页 |
| ·组织的固定 | 第83页 |
| ·组织切片的准备步骤 | 第83页 |
| ·免疫组化方法 | 第83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-87页 |
| ·家蚕蛾头部的组织形态鉴定 | 第83-84页 |
| ·CRY1 的组织表达定位 | 第84-85页 |
| ·CRY2 的组织表达定位 | 第85-87页 |
| 第三节 本章讨论 | 第87-88页 |
| 1 采用化学偶联合成抗原制备多克隆抗体方法可靠，得到了效价较高的 CRY1 和 CRY抗体 | 第87页 |
| 2 CRY1 蛋白主要分布在前脑区 | 第87页 |
| 3 CRY2 蛋白主要分布在前脑区的特异性组织细胞 | 第87-88页 |
| 第七章 综合结论 | 第88-91页 |
| 1 家蚕中存在两种类型的Cry 基因，并且具有组织和发育时期的差异性 | 第88页 |
| 2 Cry 基因是家蚕胚胎发育后期重要的生物钟基因，可能是调控家蚕滞育发生环路的重要基因 | 第88-89页 |
| 3 Cry 基因是生物钟调节环路转换光信号的核心基因 | 第89页 |
| 4 Cry 基因在生物钟环路中调节中对温度的信号转换起着重要的作用 | 第89页 |
| 5 CRY1 和CRY2 在家蚕脑部神经集中的部位表达量较高 | 第89-90页 |
| 6 进一步研究方向 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-98页 |
| 研究生期间发表文章 | 第98-99页 |
| 研究生期间登录的基因 | 第99-100页 |
| 论文资助项目 | 第100-101页 |
| 附录 | 第101-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
