| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-34页 |
| ·生物质新能源的概况 | 第10-14页 |
| ·能源危机 | 第10-11页 |
| ·生物质能及燃料乙醇 | 第11-12页 |
| ·纤维素前处理工艺 | 第12-13页 |
| ·物理方法 | 第12页 |
| ·化学方法 | 第12-13页 |
| ·物理–化学方法 | 第13页 |
| ·纤维素乙醇生产工艺 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶的研究概况 | 第14-24页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第14页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶的作用机制 | 第15-17页 |
| ·纤维素酶的分子结构 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第18-24页 |
| ·食品工业中的应用 | 第19-20页 |
| ·饲料工业中的应用 | 第20-21页 |
| ·纺织工业上的应用 | 第21-22页 |
| ·医药工业中的应用 | 第22-23页 |
| ·能源和资源开发中的应用 | 第23-24页 |
| ·蛋白固定化的研究概况 | 第24-32页 |
| ·固定化酶简介 | 第24-25页 |
| ·固定化技术研究新进展 | 第25-28页 |
| ·交联酶聚集体 | 第25-27页 |
| ·共固定技术 | 第27-28页 |
| ·定向固定技术 | 第28-32页 |
| ·非共价的生物介导的固定化方法 | 第28-30页 |
| ·通过intein 介导的连结 | 第30页 |
| ·转肽酶sortase 介导的固定化 | 第30-32页 |
| ·通过RNA 和DNA 展示系统固定化蛋白 | 第32页 |
| ·本课题的立项背景、目的与意义 | 第32-34页 |
| ·立项背景 | 第32-33页 |
| ·研究目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 野油菜黄单胞杆菌Β-1,4-内切纤维素酶的表达纯化、性质测定及其固定化 | 第34-54页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·试剂和仪器 | 第34-38页 |
| ·试验方法 | 第38-54页 |
| ·纤维素酶活性菌株的筛选 | 第38页 |
| ·菌体基因组DNA 的提取 | 第38页 |
| ·细菌165 rDNA 扩增与菌种鉴定 | 第38-39页 |
| ·分析克隆基因序列 | 第39-40页 |
| ·通过CPEC 方法克隆纤维素酶基因 | 第40-42页 |
| ·纤维素酶基因的表达与蛋白纯化 | 第42-47页 |
| ·纤维素酶学性质研究 | 第47-50页 |
| ·纤维素酶的固定化 | 第50-52页 |
| ·pTWIN 载体GFP 的纯化（几丁质柱） | 第52-54页 |
| 第三章 结果与分析 | 第54-70页 |
| ·纤维素酶活性菌株的筛选 | 第54页 |
| ·菌体基因组DNA 的提取 | 第54-55页 |
| ·细菌165 RDNA 扩增与菌种鉴定 | 第55页 |
| ·分析克隆基因序列 | 第55-56页 |
| ·CPEC 方法克隆纤维素酶基因 | 第56-60页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第56-57页 |
| ·Nhe I 和BamH I 双酶切原始空质粒pET28a | 第57页 |
| ·通用引物引入与酶切后质粒同源臂的片段2 | 第57-58页 |
| ·CPEC 方法，构建pET28a-0639ΔSP | 第58页 |
| ·纤维素酶的表达与纯化 | 第58-59页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第59-60页 |
| ·纤维素酶学性质研究 | 第60-63页 |
| ·最适pH 与最适反应温度 | 第60-61页 |
| ·pH 耐受性和温度稳定性 | 第61-62页 |
| ·纤维素酶比活的测定 | 第62页 |
| ·纤维素酶底物特异性测定 | 第62页 |
| ·纤维素酶的酶动力学常数测定 | 第62-63页 |
| ·固定化研究 | 第63-70页 |
| ·绿色荧光蛋白预实验 | 第63-67页 |
| ·pTWIN-GFP 表达载体构建策略 | 第63-66页 |
| ·几丁质法纯化GFP | 第66-67页 |
| ·固定化绿色荧光蛋白 | 第67页 |
| ·固定纤维素酶 | 第67-70页 |
| ·固定化纤维素酶的最适pH 与最适反应温度 | 第67-68页 |
| ·固定化酶的动力学常数 | 第68-70页 |
| 第四章 总结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第80-82页 |
