| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 中心体概况 | 第10-15页 |
| 1.1.1 中心体的发现 | 第10-11页 |
| 1.1.2 中心体的结构与组成 | 第11-12页 |
| 1.1.3 中心体的分离与复制 | 第12-14页 |
| 1.1.4 中心体的异常与疾病 | 第14-15页 |
| 1.2 Nek2激酶:中心体结构的主要调节者 | 第15-19页 |
| 1.2.1 Nek2蛋白剪切异构体 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Nek2蛋白的表达及其调控 | 第16-17页 |
| 1.2.3 Nek2蛋白激酶的功能 | 第17-18页 |
| 1.2.4 Nek2蛋白激酶与肿瘤 | 第18-19页 |
| 1.3 中心体蛋白Cep88 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 实验相关药品和试剂 | 第20页 |
| 2.2 实验室主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 克隆相关实验方法 | 第21-29页 |
| 2.3.1 目的基因片段的扩增 | 第21-22页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒转化 | 第22-23页 |
| 2.3.3 质粒DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.4 质粒DNA的工具酶处理 | 第24-25页 |
| 2.3.5 DNA片段的回收和纯化 | 第25-26页 |
| 2.3.6 DNA连接反应 | 第26-27页 |
| 2.3.7 相关表达质粒的构建 | 第27-29页 |
| 2.4 细胞相关实验和方法 | 第29-31页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.4.2 细胞转染 | 第30-31页 |
| 2.5 蛋白质相关实验和方法 | 第31-38页 |
| 2.5.1 免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 2.5.2 蛋白质的SDS-PAGE电泳与Western blot分析 | 第32-33页 |
| 2.5.3 细胞免疫荧光实验 | 第33-34页 |
| 2.5.4 大肠杆菌蛋白表达系统 | 第34-35页 |
| 2.5.5 蛋白激酶测定实验 | 第35页 |
| 2.5.6 昆虫杆状病毒表达系统 | 第35-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-54页 |
| 3.1 中心体蛋白Cep88与Nek2的相互作用 | 第38-45页 |
| 3.1.1 Cep88是一个新的与Nek2A相互作用的蛋白 | 第38-39页 |
| 3.1.2 过量表达的Nek2A与Cep88的相互作用 | 第39-41页 |
| 3.1.3 内源性的Cep88与Nek2A的相互作用 | 第41-43页 |
| 3.1.4 Cep88与Nek2A蛋白的体外GST pull down实验 | 第43-44页 |
| 3.1.5 Cep88的Nek2A结合区域的精确定位 | 第44-45页 |
| 3.2 中心体蛋白Cep88相关性质的研究 | 第45-51页 |
| 3.2.1 Cep88蛋白在各细胞系中的表达 | 第45-46页 |
| 3.2.2 内源性Cep88蛋白在细胞中的定位 | 第46-47页 |
| 3.2.3 稳定表达GFP-Cep88的U20S细胞系的建立 | 第47-49页 |
| 3.2.4 Cep88的中心体结合区域的精确定位 | 第49-51页 |
| 3.2.5 Cep88蛋白在细胞周期中表达水平的检测 | 第51页 |
| 3.3 Cep88蛋白抑制Nek2A蛋白激酶活性 | 第51-54页 |
| 3.3.1 Cep88蛋白体外抑制Nek2A蛋白激酶活性 | 第51-53页 |
| 3.3.2 Cep88蛋白抑制Nek2A蛋白激酶活性区段的精确定位 | 第53-54页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
