| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 绪论 | 第21-29页 |
| 1.1 蜜蜂概述 | 第21-23页 |
| 1.1.1 蜜蜂生物学特性 | 第21-22页 |
| 1.1.2 蜜蜂种群内信息交流 | 第22-23页 |
| 1.2 昆虫嗅觉系统及相关蛋白研究 | 第23-26页 |
| 1.2.1 气味结合蛋白简介 | 第24-25页 |
| 1.2.2 气味结合蛋白研究进展 | 第25-26页 |
| 1.3 新烟碱类杀虫剂概述及其影响 | 第26页 |
| 1.4 本研究内容和意义 | 第26-28页 |
| 1.4.1 研究背景 | 第26-27页 |
| 1.4.2 研究目的和意义 | 第27页 |
| 1.4.3 研究内容 | 第27-28页 |
| 1.5 技术路线 | 第28-29页 |
| 2 中华蜜蜂气味结合蛋白OBPs基因克隆和序列分析 | 第29-43页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第29-32页 |
| 2.1.1 实验材料和主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.2 中蜂工蜂触角总RNA提取及反转录 | 第30页 |
| 2.1.3 AcerOBPs基因克隆引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| 2.1.4 基因扩增、克隆及测序 | 第31页 |
| 2.1.5 基因序列和蛋白结构分析 | 第31-32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-40页 |
| 2.2.1 中蜂AcerOBPs基因扩增与克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.2 中蜂AcerOBPs基因序列分析 | 第33-39页 |
| 2.2.3 中蜂AcerOBPs蛋白结构分析 | 第39-40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-43页 |
| 3 中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBPs基因表达谱分析 | 第43-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 3.1.1 材料、试剂与仪器 | 第43页 |
| 3.1.2 总RNA的提取、c DNA第一链的合成 | 第43-44页 |
| 3.1.3 中蜂AcerOBPs荧光定量引物设计 | 第44-45页 |
| 3.1.4 real-time PCR反应 | 第45页 |
| 3.2 结果与分析 | 第45-47页 |
| 3.2.1 总RNA提取与鉴定 | 第45页 |
| 3.2.2 中蜂AcerOBPs基因相对表达量分析 | 第45-47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-49页 |
| 4 中华蜜蜂气味结合蛋白的原核表达、蛋白纯化及配基结合特征分析 | 第49-63页 |
| 4.1 材料和方法 | 第49-53页 |
| 4.1.1 材料和主要试剂 | 第49-50页 |
| 4.1.2 中蜂AcerOBPs表达载体构建 | 第50-51页 |
| 4.1.3 中蜂AcerOBPs重组蛋白的诱导表达 | 第51页 |
| 4.1.4 中蜂AcerOBPs重组蛋白的分离纯化和复性 | 第51-53页 |
| 4.1.5 中蜂AcerOBPs重组蛋白结合特征分析 | 第53页 |
| 4.2 结果与分析 | 第53-61页 |
| 4.2.1 中蜂AcerOBPs基因载体构建结果与鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2.2 中蜂AcerOBPs蛋白诱导、纯化及透析 | 第54-55页 |
| 4.2.3 中蜂AcerOBPs蛋白纯化和透析 | 第55-57页 |
| 4.2.4 中蜂AcerOBPs结合特性分析 | 第57-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-63页 |
| 5 新烟碱类杀虫剂吡虫啉与中华蜜蜂AcerOBP12结合力和结合机理研究 | 第63-71页 |
| 5.1 材料与方法 | 第63-65页 |
| 5.1.1 材料、试剂与仪器 | 第63页 |
| 5.1.2 荧光光谱测定 | 第63-64页 |
| 5.1.3 结合力分析 | 第64页 |
| 5.1.4 蛋白构象变化研究 | 第64-65页 |
| 5.2 实验结果 | 第65-69页 |
| 5.2.1 荧光猝灭结果及猝灭机制分析 | 第65-66页 |
| 5.2.2 作用力分析 | 第66-67页 |
| 5.2.3 二者作用蛋白构象变化分析 | 第67-69页 |
| 5.3 讨论 | 第69-71页 |
| 6 点突变确定AcerOBP12与吡虫啉作用中关键氨基酸位点 | 第71-81页 |
| 6.1 材料和方法 | 第71-73页 |
| 6.1.1 实验材料和主要试剂 | 第71-72页 |
| 6.1.2 结构预测和分子对接 | 第72页 |
| 6.1.3 突变引物设计和点突变 | 第72页 |
| 6.1.4 突变蛋白诱导和吡虫啉结合分析 | 第72-73页 |
| 6.2 结果和分析 | 第73-79页 |
| 6.2.1 结构预测和分子对接 | 第73-76页 |
| 6.2.2 突变引物设计和点突变及序列比对 | 第76-77页 |
| 6.2.3 突变蛋白诱导和吡虫啉结合分析 | 第77-79页 |
| 6.3 讨论 | 第79-81页 |
| 7 中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBP12抗体制备及全脑解剖 | 第81-87页 |
| 7.1 材料与方法 | 第81-83页 |
| 7.1.1 实验材料和主要试剂 | 第81页 |
| 7.1.2 中蜂AcerOBP12和乙酰胆碱受体的抗体制备及效价测定 | 第81-82页 |
| 7.1.3 中华蜜蜂全脑解剖及免疫电镜样本制备 | 第82-83页 |
| 7.2 结果与分析 | 第83-85页 |
| 7.2.1 抗原制备和效价测定 | 第83-84页 |
| 7.2.2 蜜蜂全脑解剖 | 第84-85页 |
| 7.3 讨论 | 第85-87页 |
| 8 总结和展望 | 第87-91页 |
| 8.1 研究总结 | 第87-90页 |
| 8.1.1 中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBPs基因克隆和序列分析 | 第87页 |
| 8.1.2 中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBPs基因表达谱分析 | 第87-88页 |
| 8.1.3 中华蜜蜂气味结合蛋白的原核表达、蛋白纯化及配基结合特征分析 | 第88页 |
| 8.1.4 新烟碱类杀虫剂吡虫啉与中华蜜蜂AcerOBP12结合力和结合机理研究 | 第88-89页 |
| 8.1.5 点突变确定AcerOBP12与吡虫啉作用中关键氨基酸位点 | 第89页 |
| 8.1.6 中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBP12抗体制备及全脑解剖 | 第89-90页 |
| 8.2 课题展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 附录 AccnAchRb2人工合成抗原及质量检测报告 | 第99-101页 |
| 作者简介 | 第101-102页 |
