| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| 1.1 丝状真菌产木质纤维素降解酶的研究现状 | 第8-9页 |
| 1.1.1 木质纤维素的降解利用 | 第8页 |
| 1.1.2 纤维素酶的组成以及作用方式 | 第8-9页 |
| 1.2 纤维素酶的表达调控、信号感应以及信号传导 | 第9-15页 |
| 1.2.1 纤维素酶的表达调控机制 | 第9-11页 |
| 1.2.2 纤维素酶信号分子的感应 | 第11-12页 |
| 1.2.3 蛋白激酶在真菌细胞信号传导中的作用 | 第12页 |
| 1.2.4 蛋白激酶在纤维素酶信号传导途径发挥的作用 | 第12-15页 |
| 1.3 粗糙脉孢菌是纤维素酶表达调控机理研究的模式真菌 | 第15页 |
| 1.4 本课题研究的目的意义 | 第15-17页 |
| 1.4.1 课题立项依据 | 第15-16页 |
| 1.4.2 课题研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-35页 |
| 2.1 实验仪器和试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.2 实验用菌株、质粒和引物 | 第19-23页 |
| 2.3 缓冲液和培养基 | 第23-26页 |
| 2.3.1 缓冲液的配制 | 第23-25页 |
| 2.3.2 培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.4 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.4.1 PCR扩增方法 | 第26-27页 |
| 2.4.2 大肠杆菌质粒的提取(质粒小提试剂盒) | 第27页 |
| 2.4.3 DNA片段的胶回收(试剂盒) | 第27页 |
| 2.4.4 PCR产物回收(试剂盒) | 第27-28页 |
| 2.4.5 酶切验证以及片段回收 | 第28页 |
| 2.4.6 DNA片段快速连接(试剂盒) | 第28页 |
| 2.4.7 DH5α/Transl-T1感受态细胞转化 | 第28页 |
| 2.4.8 蛋白浓度的测定 | 第28-29页 |
| 2.4.9 酶活的测定 | 第29-30页 |
| 2.4.10 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳分析 | 第30页 |
| 2.4.11 粗糙脉孢菌基因组的提取 | 第30-31页 |
| 2.4.12 粗糙脉孢菌的杂交 | 第31页 |
| 2.4.13 粗糙脉孢菌的电击转化 | 第31页 |
| 2.4.14 菌丝干重的测定 | 第31-32页 |
| 2.4.15 产孢能力的测定 | 第32页 |
| 2.4.16 丝状真菌RNA的提取和纯化 | 第32-33页 |
| 2.4.17 RT-qPCR | 第33页 |
| 2.4.18 摇瓶发酵实验 | 第33-34页 |
| 2.4.19 根癌农杆菌介导的嗜热毁丝霉转化法 | 第34-35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-57页 |
| 3.1 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因敲除突变体的筛选 | 第35-36页 |
| 3.2 突变株复筛验证 | 第36-41页 |
| 3.2.1 复筛激酶突变体蛋白浓度的测定 | 第36-37页 |
| 3.2.2 复筛激酶突变体酶活力的测定 | 第37-40页 |
| 3.2.3 突变体生物量的测定和产孢情况分析 | 第40-41页 |
| 3.2.4 激酶基因在其他丝状真菌中同源性的分析 | 第41页 |
| 3.3 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因stk-12在纤维素酶表达调控中的功能解析 | 第41-57页 |
| 3.3.1 △stk-12的回补以及过表达 | 第42-44页 |
| 3.3.2 突变株△stk-12生长、抗逆分析 | 第44-47页 |
| 3.3.3 △stk-12△cre-1双突变体的构建及表征 | 第47-49页 |
| 3.3.4 △stk-12△3βG多突变体的构建及表征 | 第49-53页 |
| 3.3.5 stk-12与PKA的关系 | 第53-55页 |
| 3.3.6 stk-12同源基因在嗜热毁丝霉中的敲除及初步表型实验 | 第55-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-65页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第65-66页 |
| 8 致谢 | 第66页 |
