| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 第一部分 山核桃叶总黄酮对人脐静脉内皮细胞衰老的干预作用 | 第11-29页 |
| 一、实验材料 | 第11-13页 |
| 1. 实验用品 | 第11页 |
| 2. 实验试剂 | 第11-12页 |
| 3. 实验仪器 | 第12页 |
| 4. 试剂配制 | 第12-13页 |
| 二、实验方法 | 第13-18页 |
| 1. 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的培养 | 第13页 |
| 2. 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)衰老模型的构建 | 第13-14页 |
| 3. 山核桃叶总黄酮干预实验分组 | 第14页 |
| 4. MTS检测细胞存活率 | 第14页 |
| 5.β-gal法检测细胞衰老程度 | 第14页 |
| 6. 流式细胞术分析细胞周期 | 第14页 |
| 7. Griess Reagent法检测NO含量 | 第14页 |
| 8. 实时荧光定量PCR检测SIRT1、E2F1、P53 mRNA的表达 | 第14-16页 |
| 9. Westen blotting检测蛋白表达 | 第16-18页 |
| 10. 统计学分析 | 第18页 |
| 三、结果 | 第18-26页 |
| 1. 构建内皮细胞衰老模型 | 第18-19页 |
| 2. 山核桃叶总黄酮对HUVECs增殖能力的影响 | 第19-20页 |
| 3. 山核桃叶总黄酮抗细胞衰老情况 | 第20-22页 |
| 4. 山核桃叶总黄酮对HUVEC细胞周期的影响 | 第22-23页 |
| 5. Griess Reagent法检测山核桃叶总黄酮对HUVEC细胞中NO含量的影响 | 第23页 |
| 6. 山核桃叶总黄酮对衰老相关基因mRNA表达水平的影响 | 第23-25页 |
| 7. Western blotting检测SIRT1、乙酰化P53、P21、cdk2蛋白表达水平的影响 | 第25-26页 |
| 四、讨论 | 第26-28页 |
| 五、小结 | 第28-29页 |
| 第二部分 miR-34a介导山核桃叶总黄酮抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的作用机制 | 第29-50页 |
| 一、实验材料 | 第29-30页 |
| 1. 实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.主要仪器 | 第30页 |
| 二. 实验方法 | 第30-37页 |
| 1. 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的培养 | 第30页 |
| 2. Westen blotting检测蛋白表达 | 第30-32页 |
| 3. SYBR Primer荧光定量PCR检测miRNAs、mRNAs的表达 | 第32-34页 |
| 4. 转染实验 | 第34-35页 |
| 5. SIRT1抑制剂最适浓度探索 | 第35页 |
| 6. miR-34a在山核桃叶总黄酮调节的HUVECs衰老的作用 | 第35-36页 |
| 7. SIRT1在HUVECs衰老miR-34a/SIRT1调控通路的作用 | 第36-37页 |
| 三、结果 | 第37-48页 |
| 1. 转染后HUVECs中miR-34a的表达情况 | 第37-38页 |
| 2. 最适SIRT1抑制剂作用浓度的探讨 | 第38-39页 |
| 3. miR-34a在山核桃叶总黄酮调节的HUVECs衰老的作用 | 第39-43页 |
| 4. SIRT1在HUVECs衰老miR-34a/SIRT1调控通路的作用 | 第43-48页 |
| 四、讨论 | 第48-49页 |
| 五、小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 文献综述 MicroRNAs在血管内皮细胞衰老中的调控机制 | 第57-65页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
