| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 H_2S的产生与生理功能 | 第11-15页 |
| 1.1.1 H_2S的产生 | 第11-12页 |
| 1.1.2 H_2S的生理功能 | 第12-15页 |
| 1.2 大肠杆菌的氧化应激 | 第15-25页 |
| 1.2.1 大肠杆菌氧化压力的来源 | 第15-16页 |
| 1.2.2 ArcAB调控系统 | 第16-18页 |
| 1.2.3 SoxRS调控系统 | 第18-20页 |
| 1.2.4 大肠杆菌的OxyR调节子 | 第20-25页 |
| 1.3 本论文的研究内容与意义 | 第25-27页 |
| 第二章 H_2S对菌体生长的影响 | 第27-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 本章所用的引物 | 第27-28页 |
| 2.1.3 本文所用试剂盒 | 第28页 |
| 2.1.4 本文所用酶及生化试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.5 试剂配制 | 第29-30页 |
| 2.1.6 本文所用仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.2.1 E.coli TSB法感受态的制备 | 第31页 |
| 2.2.2 E.coli电转感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.3 Tn5转座酶的方法构建BL21-sqr菌株 | 第32-33页 |
| 2.2.4 H_2S产量的测定 | 第33页 |
| 2.2.5 生长曲线的测定 | 第33页 |
| 2.2.6 survival test方法 | 第33页 |
| 2.2.7 氧化剂抑菌浓度的测定 | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第34-39页 |
| 2.3.1 E.coli BL21-sqr生长曲线的测定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 H_2S产生量的测定 | 第35-37页 |
| 2.3.3 H_2S的过量表达对菌体生长的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.4 H_2S不同产量菌株菌体survival test结果 | 第38页 |
| 2.3.5 H_2S对菌体MV耐受性的影响 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第三章 H_2S作用机制的研究 | 第41-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 本章所用实验菌株 | 第41页 |
| 3.1.2 本章所用引物 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1 报告质粒的构建 | 第42页 |
| 3.2.2 菌株荧光强度的测定 | 第42-43页 |
| 3.2.3 外源添加H_2S/polysulfides对菌体荧光量的影响 | 第43页 |
| 3.2.4 H_2S与MV、H_2O_2反应的测定 | 第43页 |
| 3 .2.5 polysulfides的制备 | 第43-44页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第44-48页 |
| 3.3.1 H_2S与MV、H_2O_2反应的体外测定 | 第44页 |
| 3.3.2 H-2S与SoxRS调控系统 | 第44-45页 |
| 3.3.3 H_2S与ArcAB调控系统 | 第45-47页 |
| 3.3.4 H_2S与OxyR调节子 | 第47页 |
| 3.3.5 各诱导剂对BL21菌株katG、sodA基因启动子强度的影响 | 第47-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-51页 |
| 第四章 polysulfides对OxyR诱导情况的研究 | 第51-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-54页 |
| 4.1.1 本章所用实验菌株 | 第51-52页 |
| 4.1.2 本章所用引物 | 第52-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 敲除菌株的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.2 诱导方法 | 第55页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第55-61页 |
| 4.3.1 polysulfides对katG启动子的调控是通过影响OxyR实现的 | 第55-58页 |
| 4.3.2 大肠杆菌的不同生长周期OxyR对polysulfides的响应效果不同 | 第58页 |
| 4.3.3 不同诱导时间polysulfides对OxyR的诱导效果不同 | 第58-59页 |
| 4.3.4 不同的启动子基因对OxyR的响应不同 | 第59-60页 |
| 4.3.5 oxyR基因的表达受到自身的调控 | 第60-61页 |
| 4.3.6 OxyR对H_2O_2和polysulfides敏感度的比较 | 第61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-63页 |
| 第五章 polysulfides对OxyR诱导机理的研究 | 第63-77页 |
| 5.1 实验材料 | 第63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-68页 |
| 5.2.1 OxyR蛋白的表达与纯化 | 第63-64页 |
| 5.2.2 OxyR蛋白的凝胶迁移实验(Electrophoretic Mobility ShiftAssay,EMSA) | 第64-65页 |
| 5.2.3 蛋白定量 | 第65页 |
| 5.2.4 蛋白SDS变性凝胶电泳 | 第65-66页 |
| 5.2.5 HPLC测定蛋白的聚合状态 | 第66页 |
| 5.2.6 LC/MS-MS | 第66-68页 |
| 5.3 实验结果 | 第68-74页 |
| 5.3.1 EMSA实验结果 | 第68-70页 |
| 5.3.2 H_2O_2、polysulfides对OxyR多聚体形成的影响 | 第70-71页 |
| 5.3.3 polysulfides修饰形式的检测 | 第71-72页 |
| 5.3.4 硫氧还蛋白与谷氧还蛋白对OxyR活性的影响 | 第72-74页 |
| 5.4 本章小结 | 第74-77页 |
| 第六章 全文总结与展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第86页 |
