| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 上篇 文献综述 | 第11-24页 |
| 前言 | 第12页 |
| 一 食线虫真菌研究概况 | 第12-16页 |
| 1 捕食线虫真菌 | 第13-14页 |
| 2 内寄生真菌 | 第14-15页 |
| 3 产毒真菌 | 第15页 |
| 4 机会真菌 | 第15-16页 |
| 二 食线虫真菌孢外酶研究概况 | 第16-19页 |
| 1 几丁质酶 | 第16-17页 |
| 2 丝氨酸蛋白酶 | 第17-18页 |
| 3 胶原蛋白酶 | 第18页 |
| 4 纤维素酶和木质素酶 | 第18-19页 |
| 三 内寄生真菌蠕虫埃斯特菌研究概况 | 第19-24页 |
| 下篇 研究内容 | 第24-58页 |
| 第一章 蠕虫埃斯特菌丝氨酸蛋白酶基因Evsp的克隆及分析 | 第26-38页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 1.1 供试真菌菌种来源 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第27-28页 |
| 1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 1.4 丝氨酸蛋白酶基因片段的克隆 | 第28页 |
| 1.5 RACE获取目的基因cDNA的5'和3'末端 | 第28-29页 |
| 1.6 丝氨酸蛋白酶基因gDNA全长克隆 | 第29页 |
| 1.7 丝氨酸蛋白酶基因southern杂交分析 | 第29-30页 |
| 1.8 序列分析 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.1 丝氨酸蛋白酶基因片段的扩增和cDNA全长克隆 | 第30-31页 |
| 2.2 丝氨酸蛋白酶基因的生物信息学分析 | 第31-33页 |
| 2.3 同源性搜索、多序列对比和进化树分析 | 第33-35页 |
| 2.4 丝氨酸蛋白酶基因gDNA全长克隆 | 第35-36页 |
| 2.5 丝氨酸蛋白酶基因southern blot分析 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第二章 丝氨酸蛋白酶Evsp的原核表达及活性分析 | 第38-48页 |
| 1 材料和方法 | 第39-42页 |
| 1.1 主要试剂和耗材 | 第39页 |
| 1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 1.3 原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 1.4 IPTG诱导原核表达 | 第40页 |
| 1.5 包涵体蛋白的洗涤、溶解以及纯化 | 第40-42页 |
| 1.6 丝氨酸蛋白酶活性检测 | 第42页 |
| 1.7 丝氨酸蛋白酶杀线虫活性测定 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-47页 |
| 2.1 丝氨酸蛋白酶基因Evsp原核诱导表达 | 第42-43页 |
| 2.2 包涵体的洗涤、溶解、纯化及其复性 | 第43-44页 |
| 2.3 重组蛋白rEvsp丝氨酸蛋白酶活性测定 | 第44-45页 |
| 2.4 重组蛋白酶rEvsp的杀线活性 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 丝氨酸蛋白酶基因Evsp敲除及功能分析 | 第48-58页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 1.1 主要试剂和耗材 | 第49页 |
| 1.2 主要仪器 | 第49页 |
| 1.3 Evsp基因敲除突变体的获得 | 第49-51页 |
| 1.4 原生质体的制备及转化 | 第51-52页 |
| 1.5 基因敲除突变体转化子的验证 | 第52页 |
| 1.6 缺失突变体菌株的表型分析 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-56页 |
| 2.1 基因上下臂同源片段及潮霉素抗性基因片段和融合片段的扩增 | 第53-54页 |
| 2.2 PCR筛选基因敲除突变体转化子 | 第54-55页 |
| 2.3 Southern杂交验证基因敲除突变体转化子 | 第55-56页 |
| 2.4 基因缺失突变体菌株对松材线虫的侵染能力 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 全文总结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 文章发表情况 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
