| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 综述 | 第17-44页 |
| 第一章 肝癌流行病学研究进展 | 第17-22页 |
| 第二章 肝细胞癌的病因 | 第22-24页 |
| 第三章 肝细胞癌预后情况 | 第24-26页 |
| 第四章 肝细胞癌分子生物学研究进展 | 第26-31页 |
| （一）肝癌相关的异常信号通路 | 第26-31页 |
| 1、MAPK信号通路 | 第26-27页 |
| 2、PI3K/Akt/m TOR信号通路 | 第27-29页 |
| 3、Notch信号通路 | 第29-31页 |
| 第五章 上皮间质转化（EMT）与肝癌细胞侵袭转移的关系 | 第31-33页 |
| 第六章 长链非编码RNA与肿瘤的关系 | 第33-35页 |
| 参考文献 | 第35-44页 |
| Linc RNA-p21的初步鉴定及临床意义 | 第44-113页 |
| 1 材料 | 第45-53页 |
| 1.1 实验试剂 | 第45-46页 |
| 1.2 实验仪器 | 第46-47页 |
| 1.3 实验步骤 | 第47-53页 |
| 2.实验方法 | 第53-84页 |
| 2.1 Linc RNA-p21在肝癌组织与正常肝脏组织的表达水平检测 | 第53-57页 |
| 2.1.1 病料采集 | 第53页 |
| 2.1.2 肝癌组织和癌旁正常肝脏组织总RNA的提取 | 第53-55页 |
| 2.1.3 Real-time PCR检测肝癌组织与正常肝脏组织Linc RNA-p21的表达 | 第55-57页 |
| 2.1.3.1 总CDNA合成 | 第55-56页 |
| 2.1.3.2 PCR反应 | 第56-57页 |
| 2.2 Linc RNA-p21在肝癌细胞与正常肝脏细胞的表达水平检测 | 第57-62页 |
| 2.2.1 肝癌细胞系SMMC-7721，Hep G2及正常肝细胞系L02培养 | 第57-62页 |
| 2.2.1.1 细胞复苏 | 第57-58页 |
| 2.2.1.2 细胞传代 | 第58-59页 |
| 2.2.1.3 细胞冻存 | 第59页 |
| 2.2.1.4 细胞总RNA的提取 | 第59-60页 |
| 2.2.1.5 总CDNA合成 | 第60-61页 |
| 2.2.1.6 PCR反应 | 第61-62页 |
| 2.3 ChIP检测肝癌组织乙酰化组蛋白H3和H4水平 | 第62-66页 |
| 2.3.1 病料收集 | 第62-63页 |
| 2.3.2 肝癌组织和正常肝脏组织的组蛋白乙酰化检测 | 第63-64页 |
| 2.3.3 肝癌细胞和正常肝脏细胞的组蛋白乙酰化检测 | 第64-66页 |
| 2.4 Linc RNA-p21过表达对肝癌细胞Notch和EMT表达的影响 | 第66-74页 |
| 2.4.1 肝癌细胞SMMC-7721 转染pc DNA-Linc RNA-p21 | 第66-69页 |
| 2.4.1.1 pc DNA质粒DNA的准备 | 第66页 |
| 2.4.1.2 大肠杆菌感受态的制备 | 第66-67页 |
| 2.4.1.3 质粒DNA的转化 | 第67-68页 |
| 2.4.1.4 细菌培养 | 第68页 |
| 2.4.1.5 质粒提取 | 第68-69页 |
| 2.4.2 转染前细胞准备 | 第69页 |
| 2.4.3 脂质体转染 | 第69-70页 |
| 2.4.4 脂质体转染si RNA的方法 | 第70-71页 |
| 2.4.5 转染效果检测 | 第71-74页 |
| 2.4.5.1 总RNA提取 | 第71-72页 |
| 2.4.5.2 CDNA合成 | 第72-73页 |
| 2.4.5.3 PCR反应 | 第73-74页 |
| 2.5 Western blot检测Notch信号蛋白Hes-1 和NICD的表达 | 第74-76页 |
| 2.5.1 蛋白质样品的制备 | 第74页 |
| 2.5.2 Westen blot分析 | 第74-76页 |
| 2.6 western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Claudin-1、N-cadherin和snail的表达 | 第76页 |
| 2.7 肝癌细胞Hep G2转染si RNA- Linc RNA-p21 | 第76页 |
| 2.8 western blot检测Notch信号蛋白Hes-1 和NICD的表达 | 第76-77页 |
| 2.9 western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Claudin-1、N-cadherin和snail的表达 | 第77页 |
| 2.10 DAPT处理SMMC-7721 抑制Notch信号 | 第77-79页 |
| 2.10.1 细胞培养 | 第77页 |
| 2.10.2 MTT法观察不同浓度DAPT对SMMC-7721 肝癌细胞的增殖影响 | 第77-78页 |
| 2.10.3 western blot检测Notch信号蛋白Hes-1 和NICD的表达 | 第78页 |
| 2.10.4 western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Claudin-1、N-cadherin和snail的表达 | 第78页 |
| 2.10.5 Jagged1处理Hep G2激活Notch信号 | 第78页 |
| 2.10.6 western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Claudin-1、N-cadherin和snail的表达 | 第78-79页 |
| 2.11 肝癌细胞SMMC-7721 转染pc DNA-Linc RNA-p21 | 第79-81页 |
| 2.11.1 Transwell检测细胞侵袭和转移 | 第79-80页 |
| 2.11.2 Jagged1再处理细胞 | 第80页 |
| 2.11.3 Transwell检测细胞侵袭和转移 | 第80-81页 |
| 2.12 肝癌细胞Hep G2转染si-Linc RNA-p21 | 第81页 |
| 2.13 Transwell检测细胞侵袭和转移 | 第81-82页 |
| 2.14 DAPI再处理细胞 | 第82-83页 |
| 2.15 Transwell检测细胞侵袭和转移 | 第83页 |
| 2.16 肝癌细胞SMMC-7721 稳转pc DNA-Linc RNA-p21 | 第83-84页 |
| 2.17 裸鼠注射转染后的SMMC-7721 细胞，建立肝癌小鼠模型 | 第84页 |
| 3. 实验结果 | 第84-103页 |
| 3.1 Linc RNA-p21在肝癌肿瘤组织和正常肝脏细胞中的表达 | 第84-87页 |
| 3.1.1 样品RNA的质量检测 | 第84-85页 |
| 3.1.2 在肝癌肿瘤组织中Linc RNA-p21的表达 | 第85-86页 |
| 3.1.3 Linc RNA-P21在正常细胞和肝癌细胞中的表达水平 | 第86-87页 |
| 3.2 Linc RNA-p21启动子与肝癌肿瘤组织和细胞的乙酰化组蛋白的结合情况 | 第87-90页 |
| 3.2.1 Linc RNA-p21启动子区域的组蛋白H3乙酰化水平在肝癌组织中下调 | 第87-88页 |
| 3.2.2 Linc RNA-p21启动子区域的组蛋白H3乙酰化水平在肝癌细胞中下调 | 第88-90页 |
| 3.3 Linc RNA-p21过表达对肝癌细胞Notch和EMT表达的影响 | 第90-93页 |
| 3.3.1 肝癌细胞SMMC-7721 转染pc DNA-Linc RNA-p21 | 第90-91页 |
| 3.3.2 western blot检测Notch信号蛋白Hes-1 和NICD的表达 | 第91-92页 |
| 3.3.3 western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Claudin-1、N-cadherin和snail的表达 | 第92-93页 |
| 3.4 干扰Linc RNA-p21对肝癌细胞Notch和EMT表达的影响 | 第93-96页 |
| 3.4.1 肝癌细胞Hep G2转染si RNA- Linc RNA-p21 | 第93-94页 |
| 3.4.2 western blot检测Notch信号蛋白Hes-1 和NICD的表达 | 第94-95页 |
| 3.4.3 western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Claudin-1、N-cadherin和snail的表达 | 第95-96页 |
| 3.5 抑制Notch信号对肝癌细胞EMT表达的影响 | 第96-99页 |
| 3.5.1 DAPT处理SMMC-7721 抑制Notch信号 | 第96页 |
| 3.5.2 western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Claudin-1、N-cadherin和snail的表达对比抑制前，表达存在差异性 | 第96-97页 |
| 3.5.3 Jagged1处理Hep G2激活Notch信号 | 第97-98页 |
| 3.5.4 western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Claudin-1、N-cadherin和snail的表达 | 第98-99页 |
| 3.6 激活Notch信号取消Linc RNA-p21过表达对肝癌细胞侵袭转移的抑制作用 | 第99-100页 |
| 3.6.1 肝癌细胞SMMC-7721 转染pc DNA-Linc RNA-p21 | 第99-100页 |
| 3.7 抑制Notch信号取消Linc RNA-p21干扰对肝癌细胞侵袭转移的促进作用 | 第100-101页 |
| 3.7.1 肝癌细胞Hep G2转染si-Linc RNA-p21 | 第100-101页 |
| 3.8 Linc RNA-p21过表达抑制肝癌肺转移 | 第101-103页 |
| 3.8.1 肝癌细胞SMMC-7721 稳转pc DNA-Linc RNA-p21 | 第101页 |
| 3.8.2 裸鼠注射转染后的SMMC-7721 细胞，建立肝癌小鼠模型 | 第101-103页 |
| 讨论 | 第103-109页 |
| 结论 | 第109-113页 |
| 攻读研究生期间发表的主要成绩 | 第113-114页 |
| 以第一作者发表文章 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
