| 中文摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 1 引言 | 第17-27页 |
| ·鸭瘟研究进展 | 第17-19页 |
| ·鸭瘟概述 | 第17页 |
| ·鸭瘟的诊断 | 第17-19页 |
| ·鸭瘟病毒的分离 | 第17-18页 |
| ·鸭瘟病毒血清学诊断技术 | 第18页 |
| ·鸭瘟病毒分子生物学诊断技术 | 第18-19页 |
| ·鸭瘟的防治 | 第19页 |
| ·鸭瘟病毒研究进展 | 第19-22页 |
| ·鸭瘟病毒的分类 | 第19页 |
| ·鸭瘟病毒的形态特征 | 第19-20页 |
| ·鸭瘟病毒的基因组特点 | 第20页 |
| ·鸭瘟病毒分子生物学研究进展 | 第20页 |
| ·鸭瘟病毒gB蛋白特点及研究进展 | 第20-21页 |
| ·鸭瘟病毒gC蛋白特点及研究进展 | 第21-22页 |
| ·单克隆抗体技术概述 | 第22-23页 |
| ·单克隆抗体技术的原理 | 第22页 |
| ·单克隆抗体在畜禽业的应用 | 第22-23页 |
| ·gB单克隆抗体的应用 | 第23页 |
| ·胶体金免疫层析技术概述 | 第23-26页 |
| ·胶体金免疫层析技术的原理 | 第23-24页 |
| ·胶体金的制备及特点 | 第24页 |
| ·胶体金检测试纸条的制备 | 第24-25页 |
| ·胶体金检测试纸条在畜禽疾病检测方面的应用 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-54页 |
| ·毒株、细胞株及实验动物 | 第27页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第27页 |
| ·主要试剂配制 | 第27-31页 |
| ·主要设备及仪器 | 第31-32页 |
| ·DPV各地分离株gB、gC基因的克隆及序列分析 | 第32-36页 |
| ·病料采集和保存 | 第32页 |
| ·鸭瘟病毒的分离 | 第32页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·尿囊液中病毒DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·病料组织中病毒DNA的提取 | 第33页 |
| ·DPV-gB基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·引物设计及合成 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增gB基因 | 第34页 |
| ·DPV-gC基因的克隆 | 第34页 |
| ·引物设计及合成 | 第34页 |
| ·PCR扩增gC基因 | 第34页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第34-35页 |
| ·产物的连接 | 第35页 |
| ·DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第36页 |
| ·DPV gB、gC基因测序结果的序列分析 | 第36页 |
| ·鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第36-49页 |
| ·DPV-gB蛋白的制备 | 第36-44页 |
| ·病毒的增殖 | 第36页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·引物的设计 | 第37页 |
| ·DPV-gB基因的扩增。 | 第37页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第37页 |
| ·产物的连接 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第37页 |
| ·重组表达载体pET-28a-gB的构建 | 第37-38页 |
| ·阳性质粒DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·阳性质粒的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·阳性质粒的序列测定 | 第40页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第40-41页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第41-42页 |
| ·DPV-gB蛋白的大量表达及纯化 | 第42-43页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第43页 |
| ·Western blot鉴定 | 第43-44页 |
| ·动物免疫 | 第44页 |
| ·细胞融合 | 第44-46页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·SP2/0 骨髓瘤细胞的准备 | 第45页 |
| ·致敏脾细胞的制备 | 第45页 |
| ·SP2/0 与脾细胞的融合 | 第45-46页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第46-47页 |
| ·间接ELISA基本步骤 | 第46页 |
| ·间接ELISA参数的确定 | 第46页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选培养 | 第46-47页 |
| ·间接ELISA检测抗体效价 | 第47页 |
| ·杂交瘤细胞的亚克隆 | 第47页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第47-48页 |
| ·细胞冻存 | 第47页 |
| ·细胞复苏 | 第47-48页 |
| ·腹水的制备与纯化 | 第48页 |
| ·单抗的鉴定 | 第48-49页 |
| ·效价的测定 | 第48页 |
| ·亚类的鉴定 | 第48-49页 |
| ·Western blot鉴定 | 第49页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）鉴定 | 第49页 |
| ·杂交瘤细胞的稳定性 | 第49页 |
| ·杂交瘤细胞的特异性 | 第49页 |
| ·鸭瘟病毒胶体金检测方法的建立及应用 | 第49-54页 |
| ·胶体金的制备 | 第49-50页 |
| ·器皿的预处理 | 第49页 |
| ·胶体金溶液的制备 | 第49-50页 |
| ·胶体金标抗体的制备 | 第50-51页 |
| ·标记蛋白的预处理 | 第50页 |
| ·胶体金标记单抗最适pH值的确定 | 第50页 |
| ·胶体金标记单抗最适抗体浓度的确定 | 第50页 |
| ·胶体金标记单抗 | 第50-51页 |
| ·胶体金探针的纯化 | 第51页 |
| ·胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第51-54页 |
| ·金标垫的制备 | 第51页 |
| ·样品垫的处理 | 第51页 |
| ·硝酸纤维素膜（NC膜）的选择 | 第51-52页 |
| ·T线（检测线）和C线（质控线）条件的优化 | 第52页 |
| ·NC膜的封闭 | 第52页 |
| ·试纸条的组装 | 第52页 |
| ·样品检测及结果判定 | 第52页 |
| ·试纸条性能的评价 | 第52-53页 |
| ·试纸条的初步应用 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-68页 |
| ·DPV分离株gB、gC基因的克隆及序列分析 | 第54-57页 |
| ·DPV gB、gC基因的扩增 | 第54页 |
| ·DPV-gB基因序列分析 | 第54-56页 |
| ·DPV-gC基因序列分析 | 第56-57页 |
| ·鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第57-64页 |
| ·DPV-gB基因的扩增 | 第57页 |
| ·重组质粒pET-28a-gB的酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·DPV-gB基因的序列测定与分析 | 第58页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第58-59页 |
| ·诱导时间的优化 | 第58-59页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第59页 |
| ·g B蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·gB蛋白的定量 | 第60页 |
| ·重组蛋白的western blot鉴定 | 第60-61页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第61页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第61-62页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第62-63页 |
| ·效价的测定 | 第62页 |
| ·单抗亚类的鉴定 | 第62页 |
| ·Western blot鉴定 | 第62页 |
| ·IFA鉴定 | 第62-63页 |
| ·单抗的稳定性 | 第63页 |
| ·单抗的特异性 | 第63页 |
| ·单抗的纯化 | 第63-64页 |
| ·鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体胶体金检测方法的建立 | 第64-68页 |
| ·胶体金溶液的制备 | 第64页 |
| ·胶体金标记单抗最适pH值的确定 | 第64页 |
| ·胶体金标记单抗最适抗体浓度的确定 | 第64-65页 |
| ·胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第65-68页 |
| ·金标垫和处理液的选择 | 第65页 |
| ·金标垫的处理 | 第65页 |
| ·样品垫的选择 | 第65页 |
| ·T线（检测线）和C线（质控线）条件的优化 | 第65页 |
| ·试纸条性能的评价 | 第65-68页 |
| ·特异性试验 | 第65-66页 |
| ·敏感性试验 | 第66页 |
| ·重复性试验 | 第66页 |
| ·稳定性试验 | 第66页 |
| ·试纸条的初步应用 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| ·DPV gB、gC基因扩增及序列分析 | 第68页 |
| ·DPV-gB蛋白单抗的制备 | 第68-69页 |
| ·鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体胶体金检测方法的建立与应用 | 第69-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第83页 |