| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| ·角蛋白的概述 | 第15-19页 |
| ·角蛋白的结构 | 第15-16页 |
| ·角蛋白主要应用领域 | 第16-18页 |
| ·角蛋白的降解方法 | 第18-19页 |
| ·角蛋白酶的概述 | 第19-23页 |
| ·角蛋白酶的来源 | 第19-21页 |
| ·角蛋白酶的分类 | 第21页 |
| ·角蛋白酶的理化性质 | 第21-23页 |
| ·液体发酵研究 | 第23页 |
| ·角蛋白酶基因的分子生物学研究 | 第23-25页 |
| ·研究意义及主要研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-40页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·质粒和引物 | 第26-27页 |
| ·主要试剂与药品 | 第27页 |
| ·实验常用溶液 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·主要分析软件 | 第30页 |
| ·基本方法 | 第30-32页 |
| ·提取细菌基因组DNA | 第30页 |
| ·胶回收 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·连接产物的化学转化 | 第31页 |
| ·菌落PCR | 第31页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第31-32页 |
| ·羽毛粉处理方法 | 第32页 |
| ·Bacillus aquimaris JM7以羽毛粉为底物的液体发酵单因素条件优化 | 第32-34页 |
| ·pH对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第32页 |
| ·温度对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第32页 |
| ·接种量对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第32-33页 |
| ·摇床转速对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第33页 |
| ·外加氮源对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第33页 |
| ·蔗糖含量对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第33页 |
| ·羽毛粉含量对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第33页 |
| ·羽毛种类对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第33页 |
| ·羽毛粉降解率的测定 | 第33-34页 |
| ·Bacillus aquimaris JM7以羽毛粉为底物的液体发酵正交条件优化 | 第34页 |
| ·Bacillus aquimaris JM7菌株全基因组测序 | 第34页 |
| ·角蛋白酶基因Ker02562异源表达 | 第34-38页 |
| ·角蛋白酶基因Ker02562表达引物的设计 | 第34-35页 |
| ·基因组DNA的提取及Ker02562基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·双酶切、连接及转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒双酶切验证及菌落PCR验证 | 第37页 |
| ·阳性转化子测序 | 第37页 |
| ·测序结果分析 | 第37页 |
| ·角蛋白酶Ker02562的诱导表达 | 第37页 |
| ·含Histaq的重组蛋白Ker02562的镍柱纯化 | 第37页 |
| ·目的蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第37-38页 |
| ·Ker02562基因序列及蛋白结构分析 | 第38页 |
| ·角蛋白酶酶活力的测定 | 第38页 |
| ·角蛋白酶酶学性质研究 | 第38-40页 |
| ·最适温度 | 第38页 |
| ·最适pH | 第38页 |
| ·酶的热稳定性 | 第38-39页 |
| ·酶的pH稳定性 | 第39页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第39页 |
| ·抑制剂PMSF，螯合剂EDTA和有机溶剂对酶活力的影响 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-59页 |
| ·单因素条件优化Bacillus aquimaris JM7降解羽毛粉结果分析 | 第40-44页 |
| ·pH对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第40页 |
| ·温度对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第40-41页 |
| ·接种量对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第41-42页 |
| ·摇床转速对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第42页 |
| ·外加氮源对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第42-43页 |
| ·蔗糖含量对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第43页 |
| ·羽毛粉含量对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第43-44页 |
| ·羽毛种类对Bacillus aquimaris JM7菌株降解羽毛粉的影响 | 第44页 |
| ·正交条件优化Bacillus aquimaris JM7降解羽毛粉结果分析 | 第44-47页 |
| ·正交条件确定最优条件组合 | 第44-46页 |
| ·优化后发酵液中氨基酸种类及含量 | 第46-47页 |
| ·最优条件组合下鸡毛粉降解率随时间变化曲线 | 第47页 |
| ·Bacillus aquimaris JM7菌株基因组学分析 | 第47-49页 |
| ·基因组测序及组装结果 | 第47-48页 |
| ·基因组注释 | 第48-49页 |
| ·角蛋白酶基因Ker02562异源表达 | 第49-53页 |
| ·角蛋白酶Ker02562基因序列及氨基酸序列分析 | 第49-51页 |
| ·阳性重组子的菌落PCR及双酶切验证结果 | 第51-52页 |
| ·角蛋白酶Ker02562的诱导表达及纯化 | 第52-53页 |
| ·角蛋白酶酶学性质分析 | 第53-59页 |
| ·角蛋白酶Ker02562的最适温度 | 第53-54页 |
| ·角蛋白酶Ker02562的最适pH值 | 第54-55页 |
| ·角蛋白酶Ker02562的热稳定性 | 第55-56页 |
| ·角蛋白酶Ker02562的pH稳定性 | 第56-57页 |
| ·金属离子对角蛋白酶Ker02562酶活力的影响 | 第57页 |
| ·PMSF、EDTA和有机溶剂对角蛋白酶Ker02562酶活力的影响 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-64页 |
| ·Bacillus aquimaris JM7以羽毛粉为底物的液体发酵条件优化 | 第59-61页 |
| ·角蛋白酶基因的克隆表达 | 第61-64页 |
| 第五章 结论与展望 | 第64-65页 |
| 附录：角蛋白酶Ker02562的基因序列及氨基酸序列 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 研究生期间发表及已投稿文章 | 第76页 |
