| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| ·病原特性 | 第9-10页 |
| ·形态特性 | 第9页 |
| ·培养特性 | 第9页 |
| ·APP 血清型 | 第9-10页 |
| ·APP 生化特性 | 第10页 |
| ·主要毒力因子 | 第10-11页 |
| ·Apx 毒素 | 第10页 |
| ·外膜蛋白 | 第10-11页 |
| ·荚膜多糖 | 第11页 |
| ·脂多糖 | 第11页 |
| ·转铁结合蛋白 | 第11页 |
| ·流行病学 | 第11页 |
| ·诊断方法 | 第11-13页 |
| ·病原学诊断 | 第11-12页 |
| ·血清学诊断方法 | 第12-13页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第13页 |
| ·疫苗研究状况 | 第13-16页 |
| ·灭活疫苗 | 第13-14页 |
| ·亚单位疫苗 | 第14-15页 |
| ·Ghost 疫苗 | 第15-16页 |
| ·口服疫苗 | 第16页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第16页 |
| ·防治 | 第16-17页 |
| ·加强饲养管理 | 第16页 |
| ·药物治疗 | 第16-17页 |
| ·免疫预防 | 第17页 |
| ·展望 | 第17-18页 |
| 第二章 猪胸膜肺炎放线杆菌 PCR 鉴定方法的建立 | 第18-26页 |
| ·材料与方法 | 第18-20页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-20页 |
| ·结果 | 第20-25页 |
| ·APP 复苏结果 | 第20页 |
| ·引物浓度优化结果 | 第20-21页 |
| ·退火温度优化结果 | 第21页 |
| ·引物特异性实验结果 | 第21-22页 |
| ·引物敏感性实验结果 | 第22-23页 |
| ·PCR 扩增产物基因测序结果 | 第23-24页 |
| ·分子进化树分析 | 第24页 |
| ·同源性分析 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣA 基因克隆与原核表达 | 第26-38页 |
| ·材料与方法 | 第26-33页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·酶和其他试剂 | 第26页 |
| ·溶液配制 | 第26-28页 |
| ·主要仪器及设备 | 第28页 |
| ·APP 模版 DNA 的提取 | 第28页 |
| ·ApxⅣA 基因的扩增 | 第28页 |
| ·ApxⅣA 基因的纯化回收（按照试剂盒方法回收） | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·ApxⅣA 基因与 pMD18-T Vector 的连接与克隆载体的转化 | 第29页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-ApxⅣA 的小量抽提 | 第29-30页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-ApxⅣA 的 PCR 鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-ApxⅣA 的双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-ApxⅣA 测序 | 第30页 |
| ·表达载体 pET30a-ApxⅣA 的构建 | 第30-31页 |
| ·重组原核表达载体在大肠杆菌中的诱导表达 | 第31页 |
| ·表达蛋白 SDS-PAGE 电泳分析 | 第31-32页 |
| ·包涵体蛋白的处理 | 第32页 |
| ·柱层析纯化（参照蛋白纯化镍柱说明书） | 第32-33页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-36页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-ApxⅣA 的 PCR 鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-ApxⅣA 的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-ApxⅣA 测序结果 | 第34页 |
| ·重组原核表达载体 pET-30a-ApxⅣA 的 PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·重组原核表达载体 pET-30a-ApxⅣA 的测序结果 | 第34页 |
| ·不同浓度 IPTG 诱导结果 | 第34-35页 |
| ·上清与沉淀 SDS-PAGE 电泳结果 | 第35-36页 |
| ·包涵体过柱纯化 SDS-PAGE 电泳 | 第36页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 间接 ApxⅣA-ELISA 方法的建立 | 第38-42页 |
| ·材料与方法 | 第38-39页 |
| ·仪器设备 | 第38页 |
| ·相关试剂 | 第38页 |
| ·溶液的配制 | 第38页 |
| ·间接 ELISA 相关条件的确定 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·最佳蛋白包被浓度与血清稀释度的确定 | 第39-40页 |
| ·包被液的选择 | 第40页 |
| ·封闭液的选择 | 第40页 |
| ·酶标二抗浓度的选择 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 全文总结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
