| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-13页 |
| ·选题来源 | 第9页 |
| ·高丝氨酸脱氢酶 | 第9-10页 |
| ·高丝氨酸脱氢酶的作用机制 | 第10页 |
| ·研究高丝氨酸脱氢酶的意义 | 第10-11页 |
| ·国内外研究进展 | 第11-12页 |
| ·国内相关研究进展 | 第11页 |
| ·国外相关研究进展 | 第11-12页 |
| ·本研究的目的和创新点 | 第12页 |
| ·研究的基本内容 | 第12-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-25页 |
| ·材料 | 第13-15页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13页 |
| ·酶与试剂 | 第13-14页 |
| ·仪器与设备 | 第14-15页 |
| ·试验方法 | 第15-25页 |
| ·菌体活化 | 第15-16页 |
| ·质粒 PET-28a-HSD 提取 | 第16页 |
| ·突变引物的设计 | 第16-17页 |
| ·定点突变 | 第17-18页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·突变消化产物的转化与阳性克隆筛选及鉴定 | 第19页 |
| ·目的基因的验证及测序 | 第19-20页 |
| ·突变质粒的提取 | 第20页 |
| ·E.coli BL21（DE3）感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·转化及诱导表达 | 第20页 |
| ·HSD 粗酶液的制备 | 第20页 |
| ·目的蛋白的分离与纯化 | 第20-21页 |
| ·表达产物 HSD 的 SDS-PAGE 分析 | 第21页 |
| ·表达产物 Western Blot 鉴定 | 第21-22页 |
| ·酶活测定 | 第22页 |
| ·蛋白含量测定 | 第22-23页 |
| ·酶动力学 | 第23页 |
| ·HSD 酶学性质 | 第23-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-45页 |
| ·HSD 基因定点突变 | 第25-29页 |
| ·突变位点的选择 | 第25-27页 |
| ·HSD 基因定点突变 | 第27页 |
| ·基因序列的测定 | 第27-29页 |
| ·诱导表达及其突变酶 SDS-PAGE 分析 | 第29页 |
| ·酶动力学研究 | 第29-30页 |
| ·WT 和单突变体的动力学 | 第29-30页 |
| ·L200F 和双突变体的动力学 | 第30页 |
| ·酶学性质表征 | 第30-45页 |
| ·HSD 的最适反应 pH 测定 | 第30-31页 |
| ·HSD 的最适温度及热稳定性 | 第31-33页 |
| ·有机溶剂对 HSD 酶活的影响 | 第33-36页 |
| ·金属离子对 HSD 酶活的影响 | 第36-41页 |
| ·抑制剂对 HSD 酶活的影响 | 第41-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 作者简介 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |