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单环刺螠纤溶酶的分离纯化及单环刺螠纤溶酶Ⅲ的药效学研究

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第一章 绪论第15-34页
 1. 血栓类疾病及其危害第15页
 2. 血栓的形成及溶解第15-22页
     ·凝血系统第16-17页
     ·抗凝血系统第17-18页
     ·纤维蛋白溶解系统第18-22页
     ·纤溶酶原纤溶酶第19-20页
     ·纤维蛋白(原)的降解第20-21页
     ·纤维蛋白溶解系统的抑制物第21-22页
 3. 药物治疗血栓性疾病的现状第22-26页
     ·抗血小板药物第22页
     ·抗凝药物第22-24页
     ·肝素第22-23页
     ·华法林第23页
     ·新型抗凝药物第23-24页
     ·溶栓药物第24-26页
     ·链激酶(streptokinase, SK)、尿激酶(urokinase, UK)第24-25页
     ·组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)第25页
     ·新型溶栓药物第25-26页
 4. 具备临床应用潜力溶栓蛋白的研究进展第26-31页
     ·动物来源第26-28页
     ·蛇毒第26页
     ·蚯蚓第26-27页
     ·其他动物来源第27-28页
     ·植物来源第28-29页
     ·微生物来源第29-31页
 5. 血栓动物模型研究进展第31页
 6. 单环刺螠的研究概况第31-32页
 7. 立题依据及意义第32-34页
     ·立题依据第32-33页
     ·研究意义第33-34页
第二章 单环刺螠纤溶酶的分离纯化研究第34-56页
 1. 引言第34页
 2. 材料第34-35页
   ·主要仪器设备第34-35页
   ·主要材料试剂第35页
 3. 方法第35-42页
   ·蛋白质浓度测定第35-36页
     ·紫外吸收法第35页
     ·考马斯亮蓝法(Bradford 法)第35-36页
   ·蛋白酶活力测定第36-38页
     ·Folin-酚试剂的配制第36-37页
     ·标准曲线制作第37页
     ·酶活力测定第37-38页
   ·纤溶酶活力测定第38页
   ·粗酶的制备第38页
   ·UFEⅠ的柱层析分离第38-39页
     ·Sephadex G-75 凝胶过滤层析第38页
     ·DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析第38-39页
     ·Sephacryl S-100 HR 凝胶过滤层析第39页
   ·UFEⅠ的纯度及分子量测定第39-41页
     ·UFEⅠ纯度鉴定第39-40页
     ·UFEⅠ分子量测定第40-41页
   ·UFEⅢ的柱层析分离第41-42页
     ·Sephacryl S-100 HR 凝胶过滤层析第41页
     ·Q-Sepharose Fast Flow 离子交换层析第41-42页
     ·Sephadex G-50 凝胶过滤层析第42页
   ·UFEⅢ的纯度及分子量测定第42页
     ·UFEⅢ纯度鉴定第42页
     ·UFEⅢ分子量测定第42页
 4. 结果第42-52页
   ·酶的粗提取第42-43页
   ·UFEⅠ的柱层析纯化第43-46页
   ·UFEⅠ的纯度及分子量测定第46-47页
   ·UFEⅢ的柱层析纯化第47-50页
   ·UFEⅢ的纯度及分子量测定第50-52页
 5. 讨论第52-54页
   ·单环刺螠纤溶酶的分离纯化第52-53页
     ·酶的初提第52页
     ·柱层析纯化第52-53页
     ·分离纯化工艺的建立第53页
   ·蛋白纯度的鉴定方法第53-54页
   ·UFEⅠ& Ⅲ的分子量第54页
 6. 小结第54-56页
第三章 单环刺螠纤溶酶Ⅲ的生化性质及酶学性质第56-75页
 1.引言第56页
 2. 材料第56-57页
   ·主要仪器设备第56页
   ·主要材料试剂第56-57页
 3. 方法第57-62页
   ·N 端氨基酸序列测定第57页
   ·等电点(pI 值)测定第57-58页
     ·试剂配制第57页
     ·实验步骤第57-58页
   ·总纤溶活力及纤溶酶原激酶活力测定第58-60页
     ·试剂配制第58-59页
     ·平板制作第59页
     ·尿激酶标准品标准曲线制作第59页
     ·UFEⅢ总纤溶活力测定第59页
     ·UFEⅢ直接降解纤维蛋白活力测定第59-60页
   ·纤维蛋白原降解实验第60页
     ·试剂配制第60页
     ·实验步骤第60页
   ·UFEⅢ的温度稳定性及最适反应温度第60-61页
   ·UFEⅢ的 pH 稳定性及最适反应 pH第61页
   ·金属离子及蛋白酶抑制剂对酶活力的影响第61页
   ·不同缓冲体系对 UFEⅢ稳定性的影响第61-62页
   ·底物浓度对酶反应速度的影响及 UFEⅢ酶促反应动力学常数测定第62页
 4. 结果第62-71页
   ·N 端氨基酸序列测定第62-63页
   ·等电点(pI 值)测定第63页
   ·总纤溶活力及纤溶酶原激酶活力测定第63-65页
   ·纤维蛋白原降解机理实验第65-66页
   ·温度对酶稳定性的影响及酶的最适反应温度第66-67页
   ·pH 对酶稳定性的影响及酶的最适反应 pH第67-68页
   ·金属离子及蛋白酶抑制剂对酶活力的影响第68-69页
   ·不同缓冲体系对 UFEⅢ稳定性的影响第69-70页
   ·底物浓度对酶反应速率的影响及酶促反应动力学参数的测定第70-71页
 5. 讨论第71-73页
   ·单环刺螠纤溶酶Ⅲ的纤维蛋白(原)溶解活性第71-73页
     ·单环刺螠纤溶酶Ⅲ的总纤溶活力、直接纤溶活力及纤溶酶原激酶活力第71-72页
     ·单环刺螠纤溶酶Ⅲ水解纤维蛋白原的方式第72-73页
   ·单环刺螠纤溶酶Ⅲ的酶学性质第73页
     ·温度和 pH 对 UFEⅢ酶活力的影响第73页
     ·金属离子和蛋白酶抑制剂对单环刺螠纤溶酶Ⅲ酶活力的影响第73页
 6. 小结第73-75页
第四章 单环刺螠纤溶酶Ⅲ的生物安全性研究第75-81页
 1. 引言第75页
 2. 材料第75-76页
   ·实验动物第75页
   ·主要仪器设备第75页
   ·主要材料试剂第75-76页
 3. 方法第76-77页
   ·溶血试验第76页
     ·剂量设置第76页
     ·实验步骤第76页
   ·皮下出血实验第76页
     ·剂量设置第76页
     ·实验步骤第76页
   ·全身急性毒性试验第76-77页
     ·UFEⅢ注射剂量选择第76-77页
     ·实验步骤第77页
     ·观察角度第77页
 4. 结果第77-79页
   ·溶血实验第77-78页
   ·皮下出血实验第78-79页
   ·全身急性毒性实验第79页
 5. 讨论第79-80页
 6. 小结第80-81页
第五章 单环刺螠纤溶酶Ⅲ的药效学研究第81-100页
 1. 引言第81页
 2. 材料第81-82页
   ·实验动物第81页
   ·主要仪器设备第81-82页
   ·主要材料试剂第82页
 3. 方法第82-86页
   ·UFEⅢ体外抗凝、溶栓效果第82页
     ·UFEⅢ体外抗凝第82页
     ·UFEⅢ体外溶栓第82页
   ·抗凝活性第82-83页
     ·小鼠凝血时间实验第82-83页
     ·UFEⅢ对电刺激法诱导大鼠颈动脉血栓形成的影响第83页
   ·溶栓活性第83-85页
     ·UFEⅢ对 FeCl3 诱导兔颈动脉血栓模型的影响第83-84页
     ·造模段血管石蜡切片制作及 HE 染色观察第84-85页
     ·UFEⅢ对结扎诱导大鼠下腔静脉血栓模型的影响第85页
   ·统计学分析第85-86页
 4. 结果第86-97页
   ·体外抗凝、溶栓第86-88页
     ·UFEⅢ的体外抗凝效应第86页
     ·UFEⅢ的体外溶栓效应第86-88页
   ·抗凝活性第88-90页
     ·UFEⅢ对小鼠尾静脉凝血时间影响第88页
     ·UFEⅢ对电刺激致大鼠颈动脉血栓形成的影响第88-90页
   ·溶栓活性第90-97页
     ·UFEⅢ对 FeCl3 诱导兔颈动脉血栓模型的影响第90-95页
     ·UFEⅢ对结扎诱导大鼠下腔静脉血栓模型的影响第95-97页
 5. 讨论第97-99页
 6. 小结第99-100页
结论第100-102页
参考文献第102-113页
英文缩略语第113-115页
个人简历第115页
学术论文发表情况第115-116页
致谢第116-117页

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