摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-15页 |
第一章 绪论 | 第15-34页 |
1. 血栓类疾病及其危害 | 第15页 |
2. 血栓的形成及溶解 | 第15-22页 |
·凝血系统 | 第16-17页 |
·抗凝血系统 | 第17-18页 |
·纤维蛋白溶解系统 | 第18-22页 |
·纤溶酶原纤溶酶 | 第19-20页 |
·纤维蛋白(原)的降解 | 第20-21页 |
·纤维蛋白溶解系统的抑制物 | 第21-22页 |
3. 药物治疗血栓性疾病的现状 | 第22-26页 |
·抗血小板药物 | 第22页 |
·抗凝药物 | 第22-24页 |
·肝素 | 第22-23页 |
·华法林 | 第23页 |
·新型抗凝药物 | 第23-24页 |
·溶栓药物 | 第24-26页 |
·链激酶(streptokinase, SK)、尿激酶(urokinase, UK) | 第24-25页 |
·组织型纤溶酶原激活剂(t-PA) | 第25页 |
·新型溶栓药物 | 第25-26页 |
4. 具备临床应用潜力溶栓蛋白的研究进展 | 第26-31页 |
·动物来源 | 第26-28页 |
·蛇毒 | 第26页 |
·蚯蚓 | 第26-27页 |
·其他动物来源 | 第27-28页 |
·植物来源 | 第28-29页 |
·微生物来源 | 第29-31页 |
5. 血栓动物模型研究进展 | 第31页 |
6. 单环刺螠的研究概况 | 第31-32页 |
7. 立题依据及意义 | 第32-34页 |
·立题依据 | 第32-33页 |
·研究意义 | 第33-34页 |
第二章 单环刺螠纤溶酶的分离纯化研究 | 第34-56页 |
1. 引言 | 第34页 |
2. 材料 | 第34-35页 |
·主要仪器设备 | 第34-35页 |
·主要材料试剂 | 第35页 |
3. 方法 | 第35-42页 |
·蛋白质浓度测定 | 第35-36页 |
·紫外吸收法 | 第35页 |
·考马斯亮蓝法(Bradford 法) | 第35-36页 |
·蛋白酶活力测定 | 第36-38页 |
·Folin-酚试剂的配制 | 第36-37页 |
·标准曲线制作 | 第37页 |
·酶活力测定 | 第37-38页 |
·纤溶酶活力测定 | 第38页 |
·粗酶的制备 | 第38页 |
·UFEⅠ的柱层析分离 | 第38-39页 |
·Sephadex G-75 凝胶过滤层析 | 第38页 |
·DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析 | 第38-39页 |
·Sephacryl S-100 HR 凝胶过滤层析 | 第39页 |
·UFEⅠ的纯度及分子量测定 | 第39-41页 |
·UFEⅠ纯度鉴定 | 第39-40页 |
·UFEⅠ分子量测定 | 第40-41页 |
·UFEⅢ的柱层析分离 | 第41-42页 |
·Sephacryl S-100 HR 凝胶过滤层析 | 第41页 |
·Q-Sepharose Fast Flow 离子交换层析 | 第41-42页 |
·Sephadex G-50 凝胶过滤层析 | 第42页 |
·UFEⅢ的纯度及分子量测定 | 第42页 |
·UFEⅢ纯度鉴定 | 第42页 |
·UFEⅢ分子量测定 | 第42页 |
4. 结果 | 第42-52页 |
·酶的粗提取 | 第42-43页 |
·UFEⅠ的柱层析纯化 | 第43-46页 |
·UFEⅠ的纯度及分子量测定 | 第46-47页 |
·UFEⅢ的柱层析纯化 | 第47-50页 |
·UFEⅢ的纯度及分子量测定 | 第50-52页 |
5. 讨论 | 第52-54页 |
·单环刺螠纤溶酶的分离纯化 | 第52-53页 |
·酶的初提 | 第52页 |
·柱层析纯化 | 第52-53页 |
·分离纯化工艺的建立 | 第53页 |
·蛋白纯度的鉴定方法 | 第53-54页 |
·UFEⅠ& Ⅲ的分子量 | 第54页 |
6. 小结 | 第54-56页 |
第三章 单环刺螠纤溶酶Ⅲ的生化性质及酶学性质 | 第56-75页 |
1.引言 | 第56页 |
2. 材料 | 第56-57页 |
·主要仪器设备 | 第56页 |
·主要材料试剂 | 第56-57页 |
3. 方法 | 第57-62页 |
·N 端氨基酸序列测定 | 第57页 |
·等电点(pI 值)测定 | 第57-58页 |
·试剂配制 | 第57页 |
·实验步骤 | 第57-58页 |
·总纤溶活力及纤溶酶原激酶活力测定 | 第58-60页 |
·试剂配制 | 第58-59页 |
·平板制作 | 第59页 |
·尿激酶标准品标准曲线制作 | 第59页 |
·UFEⅢ总纤溶活力测定 | 第59页 |
·UFEⅢ直接降解纤维蛋白活力测定 | 第59-60页 |
·纤维蛋白原降解实验 | 第60页 |
·试剂配制 | 第60页 |
·实验步骤 | 第60页 |
·UFEⅢ的温度稳定性及最适反应温度 | 第60-61页 |
·UFEⅢ的 pH 稳定性及最适反应 pH | 第61页 |
·金属离子及蛋白酶抑制剂对酶活力的影响 | 第61页 |
·不同缓冲体系对 UFEⅢ稳定性的影响 | 第61-62页 |
·底物浓度对酶反应速度的影响及 UFEⅢ酶促反应动力学常数测定 | 第62页 |
4. 结果 | 第62-71页 |
·N 端氨基酸序列测定 | 第62-63页 |
·等电点(pI 值)测定 | 第63页 |
·总纤溶活力及纤溶酶原激酶活力测定 | 第63-65页 |
·纤维蛋白原降解机理实验 | 第65-66页 |
·温度对酶稳定性的影响及酶的最适反应温度 | 第66-67页 |
·pH 对酶稳定性的影响及酶的最适反应 pH | 第67-68页 |
·金属离子及蛋白酶抑制剂对酶活力的影响 | 第68-69页 |
·不同缓冲体系对 UFEⅢ稳定性的影响 | 第69-70页 |
·底物浓度对酶反应速率的影响及酶促反应动力学参数的测定 | 第70-71页 |
5. 讨论 | 第71-73页 |
·单环刺螠纤溶酶Ⅲ的纤维蛋白(原)溶解活性 | 第71-73页 |
·单环刺螠纤溶酶Ⅲ的总纤溶活力、直接纤溶活力及纤溶酶原激酶活力 | 第71-72页 |
·单环刺螠纤溶酶Ⅲ水解纤维蛋白原的方式 | 第72-73页 |
·单环刺螠纤溶酶Ⅲ的酶学性质 | 第73页 |
·温度和 pH 对 UFEⅢ酶活力的影响 | 第73页 |
·金属离子和蛋白酶抑制剂对单环刺螠纤溶酶Ⅲ酶活力的影响 | 第73页 |
6. 小结 | 第73-75页 |
第四章 单环刺螠纤溶酶Ⅲ的生物安全性研究 | 第75-81页 |
1. 引言 | 第75页 |
2. 材料 | 第75-76页 |
·实验动物 | 第75页 |
·主要仪器设备 | 第75页 |
·主要材料试剂 | 第75-76页 |
3. 方法 | 第76-77页 |
·溶血试验 | 第76页 |
·剂量设置 | 第76页 |
·实验步骤 | 第76页 |
·皮下出血实验 | 第76页 |
·剂量设置 | 第76页 |
·实验步骤 | 第76页 |
·全身急性毒性试验 | 第76-77页 |
·UFEⅢ注射剂量选择 | 第76-77页 |
·实验步骤 | 第77页 |
·观察角度 | 第77页 |
4. 结果 | 第77-79页 |
·溶血实验 | 第77-78页 |
·皮下出血实验 | 第78-79页 |
·全身急性毒性实验 | 第79页 |
5. 讨论 | 第79-80页 |
6. 小结 | 第80-81页 |
第五章 单环刺螠纤溶酶Ⅲ的药效学研究 | 第81-100页 |
1. 引言 | 第81页 |
2. 材料 | 第81-82页 |
·实验动物 | 第81页 |
·主要仪器设备 | 第81-82页 |
·主要材料试剂 | 第82页 |
3. 方法 | 第82-86页 |
·UFEⅢ体外抗凝、溶栓效果 | 第82页 |
·UFEⅢ体外抗凝 | 第82页 |
·UFEⅢ体外溶栓 | 第82页 |
·抗凝活性 | 第82-83页 |
·小鼠凝血时间实验 | 第82-83页 |
·UFEⅢ对电刺激法诱导大鼠颈动脉血栓形成的影响 | 第83页 |
·溶栓活性 | 第83-85页 |
·UFEⅢ对 FeCl3 诱导兔颈动脉血栓模型的影响 | 第83-84页 |
·造模段血管石蜡切片制作及 HE 染色观察 | 第84-85页 |
·UFEⅢ对结扎诱导大鼠下腔静脉血栓模型的影响 | 第85页 |
·统计学分析 | 第85-86页 |
4. 结果 | 第86-97页 |
·体外抗凝、溶栓 | 第86-88页 |
·UFEⅢ的体外抗凝效应 | 第86页 |
·UFEⅢ的体外溶栓效应 | 第86-88页 |
·抗凝活性 | 第88-90页 |
·UFEⅢ对小鼠尾静脉凝血时间影响 | 第88页 |
·UFEⅢ对电刺激致大鼠颈动脉血栓形成的影响 | 第88-90页 |
·溶栓活性 | 第90-97页 |
·UFEⅢ对 FeCl3 诱导兔颈动脉血栓模型的影响 | 第90-95页 |
·UFEⅢ对结扎诱导大鼠下腔静脉血栓模型的影响 | 第95-97页 |
5. 讨论 | 第97-99页 |
6. 小结 | 第99-100页 |
结论 | 第100-102页 |
参考文献 | 第102-113页 |
英文缩略语 | 第113-115页 |
个人简历 | 第115页 |
学术论文发表情况 | 第115-116页 |
致谢 | 第116-117页 |