| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-22页 |
| ·MiRNA的研究现状 | 第14-18页 |
| ·MiRNA的发现 | 第14页 |
| ·MiRNA的特征和生物合成 | 第14-15页 |
| ·MiRNA与靶基因的作用机制 | 第15-16页 |
| ·MiRNA的功能研究 | 第16-17页 |
| ·家蚕miRNA研究进展 | 第17-18页 |
| ·MiR-1的研究现状 | 第18-19页 |
| ·MiR-1与肌发育分化 | 第18页 |
| ·MiR-1与心脏疾病 | 第18页 |
| ·MiR-1与癌症 | 第18-19页 |
| ·MiR-1与病毒复制 | 第19页 |
| ·家蚕miR-1的研究现状 | 第19页 |
| ·昆虫蜕皮的分子机制 | 第19-22页 |
| 第2章 引言 | 第22-24页 |
| ·研究目的与意义 | 第22页 |
| ·蜕皮和变态发育的研究是家蚕重大科学问题之一 | 第22页 |
| ·家蚕miRNA功能研究尚处于起步阶段 | 第22页 |
| ·拟回答的科学问题 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 第3章 上调bmo-miR-1导致家蚕蜕皮障碍 | 第24-30页 |
| ·材料与方法 | 第24-25页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂耗材 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·实验方法和步骤 | 第24-25页 |
| ·实验结果 | 第25-28页 |
| ·分析与讨论 | 第28-30页 |
| 第4章 上调bmo-miR-1后家蚕全基因组差异表达分析 | 第30-42页 |
| ·材料与方法 | 第30-34页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·主要实验用试剂耗材 | 第30-31页 |
| ·主要试验用仪器 | 第31页 |
| ·主要溶液配制 | 第31-32页 |
| ·RNA提取和纯化 | 第32-33页 |
| ·使用晶芯cRNA扩增标记试剂盒对样品RNA进行荧光标记 | 第33页 |
| ·芯片杂交、清洗与扫描 | 第33-34页 |
| ·芯片图像的采集与数据分析 | 第34页 |
| ·Gene orthology分类注释分析 | 第34页 |
| ·研究结果 | 第34-40页 |
| ·RNA质量检测 | 第34-35页 |
| ·数据处理和杂交结果可重复性验证 | 第35-36页 |
| ·上下调基因概况 | 第36页 |
| ·差异基因的GO分类 | 第36-38页 |
| ·上调基因和下调基因的比较 | 第38-39页 |
| ·表皮基因的差异表达 | 第39-40页 |
| ·分析与讨论 | 第40-42页 |
| ·注射bmo-miR-1 mimics导致大量基因的表达发生变化 | 第40页 |
| ·差异基因相对集中于部分GO类目中 | 第40-41页 |
| ·表皮蛋白基因的表达受到强烈调控 | 第41-42页 |
| 第5章 家蚕miR-1靶基因的预测 | 第42-46页 |
| ·材料与方法 | 第42页 |
| ·数据来源 | 第42页 |
| ·所用软件 | 第42页 |
| ·靶基因预测 | 第42页 |
| ·研究结果 | 第42-45页 |
| ·预测的bmo-miR-1靶基因 | 第42-44页 |
| ·注射bmo-miR-1 mimics后转录水平下调的靶基因 | 第44-45页 |
| ·分析与讨论 | 第45-46页 |
| ·miR-1靶基因在不同物种间具有保守性 | 第45-46页 |
| 第6章 家蚕几丁质酶基因BmChi的克隆、原核表达及抗体制备 | 第46-64页 |
| ·材料与方法 | 第46-59页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·实验用试剂 | 第46-47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·主要溶液配制 | 第47-51页 |
| ·实验方法与步骤 | 第51-59页 |
| ·实验结果 | 第59-63页 |
| ·BmChi基因序列分析 | 第59-60页 |
| ·BmChi基因克隆 | 第60页 |
| ·表达载体构建 | 第60页 |
| ·BmCHI的原核表达 | 第60-61页 |
| ·BmCHI重组蛋白的纯化 | 第61-63页 |
| ·Anti-BmCHI兔源多克隆抗体制备 | 第63页 |
| ·分析与讨论 | 第63-64页 |
| 第7章 Bmo-miR-1与BmChi调控关系的验证 | 第64-78页 |
| ·材料与方法 | 第64-70页 |
| ·实验用生物材料 | 第64页 |
| ·实验试剂 | 第64-65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·主要溶液配制 | 第65-66页 |
| ·实验方法与步骤 | 第66-70页 |
| ·实验结果 | 第70-75页 |
| ·不同实验组样品中BmChi转录水平和翻译水平表达情况 | 第70-71页 |
| ·预测BmChi 3'UTR上bmo-miR-1结合位点 | 第71-72页 |
| ·双荧光素酶报告载体的构建 | 第72-73页 |
| ·双荧光素酶检测 | 第73-74页 |
| ·家蚕几丁质酶基因BmChi的时期表达 | 第74-75页 |
| ·分析与讨论 | 第75-78页 |
| ·BmChi基因在转录水平和翻译水平均受到bmo-miR-1的抑制 | 第75页 |
| ·Bmo-miR-1可识别BmChi 3'UTR从而抑制基因的表达 | 第75-76页 |
| ·BmChi是家蚕miR-1的靶基因 | 第76页 |
| ·注射bmo-miR-1 mimics家蚕异常表型的产生与BmChi的下调有关 | 第76-78页 |
| 第8章 家蚕GH18家族几丁质酶的系统进化分析 | 第78-82页 |
| ·材料与方法 | 第78页 |
| ·数据来源 | 第78页 |
| ·分子生物学软件 | 第78页 |
| ·研究结果 | 第78-81页 |
| ·昆虫几丁质酶家族的分子进化分析 | 第78-79页 |
| ·家蚕GH18家族成员的结构分析 | 第79-80页 |
| ·家蚕几丁质酶基因BmChi的序列分析 | 第80-81页 |
| ·分析与讨论 | 第81-82页 |
| ·CHT10与CHT5的功能 | 第81页 |
| ·成虫盘生长因子IDGF的功能 | 第81页 |
| ·几丁质酶家族基因的进化 | 第81-82页 |
| 第9章 结论与讨论 | 第82-84页 |
| ·异源性bmo-miR-1导致家蚕蜕皮障碍 | 第82页 |
| ·家蚕miR-1靶基因的预测 | 第82页 |
| ·上调bmo-miR-1后家蚕全基因组差异表达 | 第82-83页 |
| ·BmChi的原核表达和抗体制备 | 第83页 |
| ·家蚕几丁质酶基因BmChi是bmo-miR-1的靶基因 | 第83页 |
| ·BmChi在家蚕蜕皮过程起重要作用 | 第83页 |
| ·BmChi的抑制不是造成注射bmo-miR-1家蚕蜕皮障碍的唯一原因 | 第83-84页 |
| 论文创新点 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 就读期间发表的文章和参研课题 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 附录 | 第98-104页 |
