| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| ·IFNβ 研究现状 | 第7页 |
| ·人血清白蛋白融合长效蛋白研究现状 | 第7-8页 |
| ·人血清白蛋白融合蛋白简介 | 第7-8页 |
| ·人血清白蛋白融合方法 | 第8页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第8-10页 |
| ·毕赤酵母表达系统简介 | 第8-9页 |
| ·毕赤酵母表达系统构成：宿主、载体和启动子 | 第9-10页 |
| ·毕赤酵母外源蛋白分泌途径研究进展 | 第10-11页 |
| ·毕赤酵母蛋白酶 | 第11-12页 |
| ·毕赤酵母胞内蛋白酶分类 | 第11-12页 |
| ·毕赤酵母蛋白酶缺陷菌株的应用 | 第12页 |
| ·立题意义和主要研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第14-25页 |
| ·实验材料 | 第14-17页 |
| ·菌种与质粒 | 第14页 |
| ·实验所用试剂 | 第14-15页 |
| ·仪器设备 | 第15-16页 |
| ·实验所用培养基及溶液 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-25页 |
| ·酵母的培养 | 第17页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第17-18页 |
| ·酵母胞内蛋白的提取 | 第18页 |
| ·蛋白质分析方法 | 第18-19页 |
| ·基因 PCR 扩增 | 第19-20页 |
| ·共表达蛋白分泌辅助因子的 HSA/IFNβ 毕赤酵母表达菌株的构建 | 第20页 |
| ·连接肽融合蛋白 HSA-L-IFNβ 毕赤酵母表达菌株的构建 | 第20-23页 |
| ·蛋白酶 yps1Δpep4Δ 双缺陷 HSA/IFNβ 毕赤酵母表达菌株构建 | 第23-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-37页 |
| ·HSA/IFNβ 融合蛋白在共表达蛋白分泌辅助因子毕赤酵母中表达 | 第25-29页 |
| ·共表达重组菌株的构建及其阳性转化子的筛选 | 第25-26页 |
| ·共表达重组菌株生长的测定 | 第26页 |
| ·共表达蛋白分泌辅助因子对融合蛋白 HSA/IFNβ 分泌表达的影响 | 第26-28页 |
| ·结果分析 | 第28-29页 |
| ·HSA-L-IFNβ 连接肽融合蛋白在毕赤酵母中表达 | 第29-32页 |
| ·表达载体 pPIC9K-HSA-L-IFNβ 的构建 | 第29-30页 |
| ·重组菌 GS115/pPIC9K-HSA-L-IFNβ 的构建与表达 | 第30-31页 |
| ·结果分析 | 第31-32页 |
| ·HSA/IFNβ 融合蛋白在蛋白酶 yps1Δpep4Δ 双缺陷毕赤酵母中表达 | 第32-37页 |
| ·敲除序列 Up-Cre-Down 构建 | 第32-33页 |
| ·蛋白酶 yps1Δpep4Δ 双缺陷毕赤酵母的构建与鉴定 | 第33-34页 |
| ·蛋白酶双缺陷菌株生长的测定 | 第34页 |
| ·HSA/IFNβ 在 yps1Δpep4Δ 双缺陷毕赤酵母中的表达 | 第34-35页 |
| ·结果分析 | 第35-37页 |
| 第四章 主要结论和展望 | 第37-38页 |
| ·主要结论 | 第37页 |
| ·存在的问题与展望 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |
