| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略语 | 第13-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-41页 |
| ·植物凝集素 | 第18-26页 |
| ·植物凝集素的发现 | 第18页 |
| ·植物凝集素的定义 | 第18-19页 |
| ·植物凝集素的分类 | 第19-20页 |
| ·植物凝集素的结构 | 第20-21页 |
| ·植物凝集素的分离纯化 | 第21-22页 |
| ·植物凝集素的生物活性 | 第22-25页 |
| ·抗昆虫作用 | 第22-23页 |
| ·抗真菌作用 | 第23页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第23-24页 |
| ·抗病毒作用 | 第24页 |
| ·生物固氮作用 | 第24-25页 |
| ·植物凝集素的应用 | 第25-26页 |
| ·植物蛋白酶抑制剂 | 第26-28页 |
| ·植物蛋白酶抑制剂简介 | 第26页 |
| ·植物蛋白酶抑制剂的分类 | 第26页 |
| ·植物蛋白酶抑制剂的应用 | 第26-28页 |
| ·半夏凝集素 | 第28-35页 |
| ·半夏简介 | 第28页 |
| ·半夏块茎成分研究 | 第28-30页 |
| ·半夏多糖 | 第28-29页 |
| ·生物碱 | 第29页 |
| ·氨基酸类 | 第29页 |
| ·半夏蛋白 | 第29-30页 |
| ·有机酸类 | 第30页 |
| ·挥发油类 | 第30页 |
| ·半夏凝集素的发现 | 第30-31页 |
| ·半夏凝集素生理活性 | 第31页 |
| ·半夏凝集素晶体结构 | 第31-33页 |
| ·半夏凝集素的克隆表达研究进展 | 第33-34页 |
| ·半夏凝集素转基因植物研究 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌可溶性表达外源蛋白策略 | 第35-39页 |
| ·大肠杆菌表达系统特点 | 第35-36页 |
| ·可溶性表达策略 | 第36-39页 |
| ·培养条件的优化 | 第36-37页 |
| ·分泌表达 | 第37页 |
| ·信号肽结构与功能 | 第37-38页 |
| ·分泌途径 | 第38-39页 |
| ·本研究的目的与研究内容 | 第39-41页 |
| ·研究目的 | 第39-40页 |
| ·研究内容 | 第40-41页 |
| 第二章 半夏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化 | 第41-51页 |
| 前言 | 第41页 |
| ·材料与试剂 | 第41-42页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41-42页 |
| ·实验方法步骤 | 第42-45页 |
| ·半夏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳检测 | 第43-44页 |
| ·Native-PAGE 电泳检测 | 第44页 |
| ·半夏胰蛋白酶抑制剂活力测定 | 第44页 |
| ·PTTI 多糖含量测定 | 第44-45页 |
| ·热稳定性与酸碱稳定性分析 | 第45页 |
| ·实验结果与讨论 | 第45-50页 |
| ·实验结果 | 第45-48页 |
| ·硫酸铵沉淀结果 | 第45-46页 |
| ·亲和纯化分离结果 | 第46-47页 |
| ·多糖含量测定的标准曲线 | 第47页 |
| ·PTTI 抑制活力测定结果 | 第47页 |
| ·热稳定性与酸碱稳定性 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 半夏凝集素纯化条件的优化 | 第51-60页 |
| 前言 | 第51页 |
| ·实验材料和试剂 | 第51-52页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51-52页 |
| ·主要试剂的配制 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-54页 |
| ·硫酸铵沉淀总蛋白 | 第52-53页 |
| ·Mannose-Sepharose 4B 亲和层析 | 第53页 |
| ·凝血活性检测 | 第53-54页 |
| ·实验结果 | 第54-57页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第54页 |
| ·亲和纯化条件优化 | 第54-55页 |
| ·不同纯化方法的比较 | 第55-56页 |
| ·凝血活性 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 半夏凝集素 PTA-N 的可溶表达与活性鉴定 | 第60-85页 |
| 前言 | 第60-61页 |
| ·实验材料和主要试剂 | 第61-62页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·主要试剂的配制 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-71页 |
| ·重组蛋白 rPTA-N 的获得 | 第62-69页 |
| ·引物序列设计 | 第62页 |
| ·半夏凝集素 N 端结构域 pta-n 基因的克隆 | 第62-65页 |
| ·载体片段的获得 | 第65页 |
| ·apsp-pta-n 与 pET-28a 酶连 | 第65-66页 |
| ·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第66页 |
| ·重组子的转化与鉴定 | 第66-67页 |
| ·重组工程菌的获得 | 第67页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第67-68页 |
| ·目的蛋白 rPTA-N 的分离纯化 | 第68-69页 |
| ·重组 rPTA-N 的活性鉴定 | 第69-71页 |
| ·凝血活性分析 | 第69页 |
| ·抗真菌活性分析 | 第69页 |
| ·抗肿瘤活性分析 | 第69-70页 |
| ·凋亡 Hochest33342 核染色检测 | 第70页 |
| ·DNA 片段化检测细胞凋亡 | 第70-71页 |
| ·结果 | 第71-79页 |
| ·融合基因 apsp-pta-n 的融合与扩增 | 第71-72页 |
| ·重组质粒的 PCR 与双酶切鉴定 | 第72-73页 |
| ·目的蛋白的诱导表达与纯化 | 第73-74页 |
| ·凝血活性分析 | 第74-75页 |
| ·抗真菌活力分析 | 第75页 |
| ·抗肿瘤活性分析 | 第75-76页 |
| ·肿瘤细胞形态学观察结果 | 第76-77页 |
| ·Hochest 33342 核染色结果 | 第77-78页 |
| ·DNA 片段化分析结果 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-84页 |
| ·目的基因 apsp-pta-n 的融合与表达 | 第79-81页 |
| ·重组 rPTA-N 与天然 PTA 的活性 | 第81-84页 |
| ·本章小结 | 第84-85页 |
| 总结与展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
