刺糖多孢菌eryR基因的克隆与功能研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1 刺糖多孢菌及多杀菌素的研究进展 | 第10-15页 |
| ·刺糖多孢菌 | 第10页 |
| ·多杀菌素 | 第10-11页 |
| ·多杀菌素的结构特点和理化性质 | 第11-12页 |
| ·多杀菌素的生物合成 | 第12-14页 |
| ·多杀菌素的杀虫作用机制 | 第14页 |
| ·提高多杀菌素产量 | 第14-15页 |
| 2 链霉菌次生代谢调控的研究进展 | 第15-17页 |
| ·链霉菌 | 第15页 |
| ·链霉菌次生代谢途径的专一性调控 | 第15-17页 |
| 3 eryR基因的研究进展 | 第17-18页 |
| 4 立题依据和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-39页 |
| 1 材料 | 第20-26页 |
| ·供试菌株 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第22页 |
| ·工具酶 | 第22-23页 |
| ·PCR引物及产物测序 | 第23页 |
| ·试剂盒 | 第23页 |
| ·常用溶液和缓冲液 | 第23-26页 |
| 2 研究方法 | 第26-39页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第26页 |
| ·刺糖多孢菌基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量提取 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28-30页 |
| ·DNA的连接 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第31页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第31-32页 |
| ·转化子的快速筛选 | 第32页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·eryR-s基因的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·eryR-s基因大肠杆菌表达载体的构建 | 第33页 |
| ·IPTG诱导大肠杆菌中重组基因的表达 | 第33页 |
| ·胶内酶解法制备蛋白质谱样品 | 第33-34页 |
| ·eryR-s基因链霉菌表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·eryR-s基因敲除载体的构建 | 第35-37页 |
| ·大肠杆菌与链霉菌之间的属间接合转移 | 第37-38页 |
| ·发酵培养 | 第38页 |
| ·放线紫红素产量的测定 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-49页 |
| 1 刺糖多孢菌eryR-S基因的克隆 | 第39页 |
| 2 eryR-s蛋白的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| ·一级结构的预测 | 第39-40页 |
| ·二级结构的预测 | 第40页 |
| ·eryR-s蛋白质谱分析结果 | 第40-41页 |
| 3 eryR-s基因的功能研究 | 第41-49页 |
| ·eryR-s基因在大肠杆菌中的表达 | 第41-42页 |
| ·eryR-s基因在链霉菌中的表达 | 第42-46页 |
| ·eryR-s敲除载体的构建 | 第46-49页 |
| 第四章 讨论 | 第49-53页 |
| 第五章 主要结论和今后的研究设想 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第63-64页 |
| 课题受资助的基金项目 | 第64-65页 |
