| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| ·NMD途径的分子机制 | 第15-17页 |
| ·酵母细胞中的“3’UTR”模型 | 第15-16页 |
| ·哺乳动物细胞中的“EJC”模型 | 第16-17页 |
| ·人类NMD途径的重要因子 | 第17-18页 |
| ·UPF1的结构与功能 | 第17-18页 |
| ·SMG1的结构与功能 | 第18页 |
| ·NMD途径与人类疾病 | 第18-19页 |
| ·抑癌基因概述 | 第19-20页 |
| ·MEN1基因简介 | 第19页 |
| ·MEN1基因无义突变与疾病 | 第19-20页 |
| ·本课题研究思路及方法 | 第20-22页 |
| 第二章 人类抑癌基因MEN1真核表达载体的构建 | 第22-32页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·细胞、菌株和质粒 | 第22页 |
| ·主要的酶和生化试剂 | 第22页 |
| ·主要试剂的配置 | 第22-23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-27页 |
| ·HEK-293细胞培养 | 第23-24页 |
| ·HEK-293细胞基因组的提取 | 第24页 |
| ·MEN1基因的克隆及表达载体构建 | 第24-27页 |
| ·MEN1基因无义突变体的构建 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-29页 |
| ·pcDNA3.1-Myc-HA-MEN1A重组质粒鉴定 | 第27-28页 |
| ·pcDNA3.1-Myc-HA-MEN1重组质粒鉴定 | 第28-29页 |
| ·MEN1无义突变体的构建 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 无义突变的MEN1抑癌基因的表达受NMD途径调控 | 第32-40页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·细胞株与质粒 | 第32页 |
| ·主要的生化试剂 | 第32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·C6、Hela的培养 | 第33页 |
| ·重组质粒浓度的测定 | 第33页 |
| ·重组质粒转染细胞 | 第33-34页 |
| ·细胞Total RNA提取 | 第34页 |
| ·细胞总蛋白的提取及浓度测定 | 第34页 |
| ·Western Blot检测 | 第34-35页 |
| ·细胞mRNA水平的测定 | 第35页 |
| ·实验结果 | 第35-38页 |
| ·野生型及突变体MEN1 mRNA表达含量检测 | 第35-36页 |
| ·野生型及突变体MEN1蛋白表达含量检测 | 第36页 |
| ·无义突变体受NMD途径调控 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 促通读药物对于无义突变体的影响 | 第40-49页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·细胞株与质粒 | 第40页 |
| ·主要的生化试剂 | 第40页 |
| ·主要试剂的配制 | 第40-41页 |
| ·主要实验仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-42页 |
| ·细胞培养方法 | 第41页 |
| ·细胞总RNA提取及qRT－PCR | 第41页 |
| ·细胞蛋白提取及Western Blot检测 | 第41页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-47页 |
| ·G418对无义突变体的影响 | 第42-43页 |
| ·PTC124对无义突变体的影响 | 第43-44页 |
| ·全长蛋白恢复后的活性检测 | 第44-46页 |
| ·突变体全长蛋白恢复后对细胞生长的影响 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 总结与展望 | 第57-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 个人简介及联系方式 | 第62-64页 |
