| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-15页 |
| 1. 研究背景 | 第12-14页 |
| 2. 研究意义 | 第14-15页 |
| 第二章 lkb1和Pten基因的克隆以及IRES2片段的获得 | 第15-26页 |
| 1. 引言 | 第15页 |
| 2. 实验材料 | 第15-16页 |
| ·相关试剂和菌种 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15-16页 |
| 3. 实验方法 | 第16-22页 |
| ·反转录PCR获得cDNA模板 | 第16-17页 |
| ·lkb1基因的克隆 | 第17页 |
| ·Pten基因的克隆 | 第17-18页 |
| ·IRES2片段的获得及测序 | 第18-22页 |
| ·IRES2片段的扩增 | 第18-19页 |
| ·IRES2扩增产物纯化 | 第19页 |
| ·E.coli DH5α大肠杆菌感受态细胞制备 | 第19-20页 |
| ·IRES2纯化产物连接pMD-19T载体 | 第20页 |
| ·连接液转化E.coli DH5α大肠杆菌感受态细胞 | 第20-21页 |
| ·pMD-19T-IRES2质粒提取 | 第21页 |
| ·pMD-19T-IRES2质粒酶切鉴定及测序 | 第21-22页 |
| 4. 实验结果 | 第22-25页 |
| ·PCR扩增lkb1基因 | 第22页 |
| ·PCR扩增Pten基因 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增IRES2片段 | 第23-24页 |
| ·重组pMD-19T-IRES2质粒双酶切鉴定 | 第24页 |
| ·测序鉴定 | 第24-25页 |
| 5. 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 多顺反子表达载体的构建 | 第26-44页 |
| 1. 引言 | 第26-27页 |
| 2. 实验材料 | 第27页 |
| ·相关试剂和菌种 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| 3. 实验方法 | 第27-38页 |
| ·pIRL双顺反子表达载体的构建 | 第27-31页 |
| ·DNA片段的纯化 | 第28页 |
| ·LKBI片段酶切 | 第28-29页 |
| ·pIRES2-DsRed2载体的酶切 | 第29页 |
| ·LKB1片段与pIRES2-DsRed2载体连接 | 第29-30页 |
| ·连接液转化DH5α大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| ·pIRL质粒提取 | 第30-31页 |
| ·酶切鉴定pIRL重组质粒 | 第31页 |
| ·pIRP双顺反子表达载体的构建 | 第31-33页 |
| ·PTEN片段酶切 | 第32页 |
| ·pIRES2-DsRed2载体酶切 | 第32页 |
| ·PTEN片段与pIRES2-DsRed2载体连接 | 第32-33页 |
| ·酶切鉴定pIRP重组质粒 | 第33页 |
| ·pIRPI重组载体的构建 | 第33-35页 |
| ·pMD-19T-IRES2载体酶切 | 第33-34页 |
| ·IRES2片段切胶回收 | 第34页 |
| ·pIRP载体酶切 | 第34-35页 |
| ·IRES2片段与pIRP载体连接 | 第35页 |
| ·pIRPIL三顺反子表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·pIRPI载体酶切 | 第36页 |
| ·pIRL载体酶切 | 第36页 |
| ·PTEN-IRES2片段与pIRL载体连接 | 第36-37页 |
| ·酶切鉴定pIRPIL载体 | 第37-38页 |
| 4. 实验结果 | 第38-41页 |
| ·酶切鉴定pIRL载体 | 第38-39页 |
| ·酶切鉴定pIRP载体 | 第39页 |
| ·酶切鉴定pIRPI载体 | 第39-40页 |
| ·酶切鉴定pIRPIL载体 | 第40-41页 |
| 5. 讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 多顺反子表达载体转染HeLa细胞 | 第44-50页 |
| 1. 引言 | 第44页 |
| 2. 实验材料 | 第44页 |
| ·相关试剂和细胞 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| 3. 实验方法 | 第44-47页 |
| ·细胞复苏 | 第44-45页 |
| ·细胞换液 | 第45页 |
| ·细胞传代 | 第45-46页 |
| ·细胞冻存 | 第46页 |
| ·质粒转染 | 第46-47页 |
| 4. 实验结果 | 第47-49页 |
| ·正常生长HeLa细胞 | 第47页 |
| ·pIRES2-DsRed2质粒转染HeLa细胞 | 第47-48页 |
| ·pIRL质粒转染HeLa细胞 | 第48页 |
| ·pIRP质粒转染HeLa细胞 | 第48-49页 |
| 5. 讨论 | 第49-50页 |
| 第五章 LKB1对PTEN磷酸化水平和活性的提高 | 第50-56页 |
| 1. 引言 | 第50页 |
| 2. 实验材料 | 第50页 |
| 3. 实验方法 | 第50-52页 |
| ·SDS-PAGE步骤 | 第50-51页 |
| ·Western blot检测 | 第51-52页 |
| ·转染LKB1对PTEN磷酸化水平的检测 | 第52页 |
| ·转染LKB1对PTEN磷酸酶活性的鉴定 | 第52页 |
| 4. 实验结果 | 第52-55页 |
| ·Western blot检测目的蛋白的表达 | 第52-53页 |
| ·LKB1提高PTEN的磷酸化水平 | 第53-54页 |
| ·LKB1提高PTEN的磷酸酶活性 | 第54-55页 |
| 5. 讨论 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 文献综述 | 第62-71页 |
| 参考文献（References) | 第66-71页 |
| 攻读硕士期间发表的论文和参加的研究项目 | 第71-73页 |
| 附录 | 第73-90页 |
