| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 縮略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 实验研究 | 第12-56页 |
| 第一章 K14启动子的功能验证 | 第12-23页 |
| 1 材料 | 第12-13页 |
| ·实验仪器设备 | 第12-13页 |
| ·试验材料 | 第13页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第13页 |
| 2 方法 | 第13-16页 |
| ·人基因组DNA提取 | 第13页 |
| ·克隆K14启动子与CMV启动子 | 第13-14页 |
| ·pK14-DsRed和pCMV-DsRed载体构建 | 第14页 |
| ·细胞的分离及培养 | 第14-16页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞的分离及培养 | 第14页 |
| ·绒山羊表皮细胞的分离及培养 | 第14-15页 |
| ·绒山羊初级毛乳头细胞的分离及培养 | 第15页 |
| ·细胞转染及筛选 | 第15页 |
| ·Real-time PCR检测 | 第15-16页 |
| 3 结果 | 第16-19页 |
| ·K14启动子克隆结果 | 第16页 |
| ·载体构建 | 第16-17页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞和山羊表皮细胞的分离和培养 | 第17页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的分离及培养 | 第17页 |
| ·山羊表皮细胞的分离及培养 | 第17页 |
| ·初级毛乳头细胞的分离及培养 | 第17页 |
| ·细胞转染及筛选 | 第17-18页 |
| ·Real-time PCR检测转染阳性细胞红荧光蛋白基因的表达 | 第18-19页 |
| 4 讨论 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第二章 打靶载体的构建 | 第23-39页 |
| 1 材料 | 第24页 |
| ·实验仪器设备 | 第24页 |
| ·菌种与载体 | 第24页 |
| ·主要实验材料、试剂与耗材 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·克隆Edar基因cDNA序列 | 第25页 |
| ·克隆Edar基因打靶载体的拟同源臂序列 | 第25-27页 |
| ·构建Edar基因打靶载体 | 第27-30页 |
| ·多克隆位点序列设计 | 第27页 |
| ·克隆Edar基因打靶载体的同源臂 | 第27-28页 |
| ·克隆Edar基因打靶靶芯片段 | 第28-29页 |
| ·克隆HSV-tk基因、Cre基因和polyA片段 | 第29页 |
| ·Edar基因打靶载体组装 | 第29-30页 |
| ·pKnock-Edar载体组装 | 第29-30页 |
| ·pK14-Cre载体组装 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-34页 |
| ·Edar基因cDNA序列的分析 | 第30-31页 |
| ·Edar基因打靶载体的拟同源臂序列分析 | 第31-32页 |
| ·构建Edar基因打靶载体 | 第32-34页 |
| ·Edar基因打靶载体的同源臂的克隆 | 第32-33页 |
| ·Edar基因打靶靶芯片段的获得 | 第33页 |
| ·HSV-tk基因、cre基因和polyA片段的获得 | 第33-34页 |
| ·Edar基因打靶载体组装 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-39页 |
| 第三章 Edar基因打靶细胞系的筛选 | 第39-46页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| ·实验仪器设备 | 第39页 |
| ·试验材料 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-41页 |
| ·Edar基因打靶载体pKnock-Edar转染细胞及药物筛选 | 第40页 |
| ·筛选Edar基因打靶阳性细胞及鉴定 | 第40-41页 |
| ·筛选Edar基因打靶阳性细胞 | 第40页 |
| ·Edar基因打靶阳性细胞的鉴定 | 第40-41页 |
| ·Edar基因打靶载体pK14-cre质粒转染打靶阳性细胞 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-43页 |
| ·Edar基因打靶载体pKnock-Edar转染细胞及药物筛选 | 第41-42页 |
| ·筛选Edar基因打靶阳性细胞 | 第42页 |
| ·Edar基因打靶载体pK14-Cre转染打靶阳性细胞 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 图版1 | 第47-48页 |
| 图版2 | 第48-49页 |
| 图版3 | 第49-50页 |
| 附录 | 第50-56页 |
| 第二部分 文献综述 | 第56-66页 |
| 1 基因打靶的基本原理 | 第56-57页 |
| ·Holliday双链侵入模型 | 第56-57页 |
| ·单链侵入模型 | 第57页 |
| ·双链断裂修复模型 | 第57页 |
| 2 基因打靶载体的类型 | 第57-58页 |
| ·插入型打靶载体 | 第57-58页 |
| ·置换型打靶载体 | 第58页 |
| 3 基因打靶策略 | 第58-59页 |
| ·“打了就走”策略 | 第58-59页 |
| ·标记置换策略 | 第59页 |
| ·Cre-LoxP重组系统策略 | 第59页 |
| 4 条件性基因打靶 | 第59-60页 |
| 5 基因打靶技术的应用 | 第60页 |
| ·基因功能研究方面 | 第60页 |
| ·病理模型和基因治疗方面 | 第60页 |
| ·器官移植研究中的应用 | 第60页 |
| ·培育优良品种方面的应用 | 第60页 |
| 6 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第67页 |
