| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-21页 |
| ·蛇毒磷脂酶A_2的概述 | 第10页 |
| ·蛇毒磷脂酶A_2的分类 | 第10-11页 |
| ·磷脂酶A_2的结构特征 | 第11-14页 |
| ·一级结构特征 | 第11-12页 |
| ·高级结构特征 | 第12-14页 |
| ·磷脂酶A_2的生理活性 | 第14-19页 |
| ·突触前神经毒素 | 第14-15页 |
| ·肌肉毒性 | 第15页 |
| ·诱导和抑制血小板聚集活性 | 第15-16页 |
| ·诱导组织水肿 | 第16-17页 |
| ·抗菌作用 | 第17-18页 |
| ·抗肿瘤的活性 | 第18页 |
| ·炎症作用 | 第18页 |
| ·抗凝血活性 | 第18-19页 |
| ·蛋白质工程 | 第19页 |
| ·蛋白质工程的简介 | 第19页 |
| ·定点突变 | 第19页 |
| ·本文研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二部分 融合蛋白EDDIE-TS-G6D49基因的克隆及表达 | 第21-37页 |
| ·实验材料与仪器 | 第21-25页 |
| ·实验仪器 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·目标基因的优化 | 第25-26页 |
| ·引物设计及PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的回收和T载体连接 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·转化 | 第28-29页 |
| ·质粒的小量制备 | 第29页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第30页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第31页 |
| ·包涵体的分离以及变性和复性 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-37页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·pMD18-T-EDDIE-TS-G6D49克隆载体的鉴定 | 第33-34页 |
| ·pET-30a-EDDIE-TS-G6D49表达载体的鉴定 | 第34-35页 |
| ·EDDIE-TS-G6D49诱导表达 | 第35-37页 |
| 第三部分 TS-G6D49基因的克隆及表达 | 第37-46页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·载体构建及表达 | 第37-38页 |
| ·TS-G6D49酶活性的测定 | 第38页 |
| ·TS-G6D49的HPLC纯化 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-46页 |
| ·pMD18-T-TS-G6D49克隆载体的鉴定 | 第39-40页 |
| ·pET-30a-TS-G6D49表达载体的鉴定 | 第40-42页 |
| ·TS-G6D49诱导表达及纯化 | 第42-45页 |
| ·TS-G6D49酶活性的测定 | 第45-46页 |
| 第四部分 磷脂酶A_2突变体的设计及表达 | 第46-56页 |
| ·实验方法 | 第46-51页 |
| ·突变位点的设计 | 第46-50页 |
| ·突变基因M-1,M-4序列及突变方法 | 第50页 |
| ·突变质粒的获得 | 第50-51页 |
| ·突变蛋白载体构建及表达 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-56页 |
| ·突变基因克隆载体的鉴定 | 第51-52页 |
| ·突变基因表达载体的鉴定 | 第52-54页 |
| ·突变蛋白的表达 | 第54-56页 |
| 第五部分 总结与讨论 | 第56-59页 |
| ·总结 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-59页 |
| ·EDDIE-TS-G6D49的变复性 | 第56-57页 |
| ·TS-G6D49的表达 | 第57-58页 |
| ·磷脂酶A_2结构与功能的关系 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
