| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述部分 | 第13-23页 |
| 1 黄曲霉毒素的研究概况 | 第13-15页 |
| ·黄曲霉毒素的发现与其引发的社会事件 | 第13-14页 |
| ·黄曲霉毒素的发现 | 第13页 |
| ·黄曲霉毒素相关社会事件 | 第13-14页 |
| ·黄曲霉毒素的结构、分类及分布 | 第14-15页 |
| ·黄曲霉毒素的理化性质 | 第15页 |
| 2 黄曲霉毒素在食品和饲料中的限量标准 | 第15-17页 |
| ·国外情况 | 第15-16页 |
| ·国内情况 | 第16-17页 |
| ·食品中真菌毒素限量 | 第16页 |
| ·我国饲料中黄曲霉毒素的限量规定 | 第16-17页 |
| 3 黄曲霉毒素与动物疾病 | 第17-19页 |
| ·黄曲霉毒素B_1中毒的临床症状 | 第17页 |
| ·AFB_1致病机理研究 | 第17-18页 |
| ·黄曲霉毒素对动物免疫系统影响 | 第18-19页 |
| 4. 黄曲霉毒素的检测方法 | 第19-23页 |
| ·薄层层析法(TLC) | 第19-20页 |
| ·免疫化学方法 | 第20-21页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELISA) | 第20-21页 |
| ·免疫亲合层析法 | 第21页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC) | 第21-22页 |
| ·微柱法 | 第22-23页 |
| 第二章 黄曲霉毒素B_1完全抗原合成及鼠源多抗血清的制备 | 第23-35页 |
| 引言 | 第23页 |
| 1 实验材料 | 第23-24页 |
| ·实验试剂与溶液 | 第23-24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·试验动物 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-29页 |
| ·AFB_1完全抗原的制备 | 第24-27页 |
| ·黄曲霉毒素B_1肟化酯的制备 | 第24-25页 |
| ·免疫抗原的制备 | 第25页 |
| ·检测抗原AFB_1-OVA的制备 | 第25-27页 |
| ·完全抗原的鉴定 | 第27-29页 |
| ·薄层层析法(TLC)对AFB_1肟的鉴定 | 第27页 |
| ·测定蛋白质浓度 | 第27页 |
| ·紫外光谱(UV)鉴定 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定 | 第27页 |
| ·AFB_1-BSA鼠原多抗血清(poly antibody,pAb)制备 | 第27-28页 |
| ·AFB_1多抗血清的鉴定 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-34页 |
| ·完全抗原的鉴定结果 | 第29-31页 |
| ·薄层层析色谱法对AFB_1O的鉴定结果 | 第29页 |
| ·蛋白浓度测定结果 | 第29页 |
| ·紫外光谱(UV)鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定结果 | 第30-31页 |
| ·多抗血清的测定结果及分析 | 第31-34页 |
| ·间接ELISA测定的效价结果 | 第31-32页 |
| ·多抗血清敏感性鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·多抗血清特异性测定结果 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34页 |
| ·AFB_1人工抗原的制备 | 第34页 |
| ·鼠原抗血清的制备 | 第34页 |
| 5 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第35-59页 |
| 1 实验材料与溶液配制 | 第35-39页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·实验动物和细胞 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·溶液的配制 | 第36-39页 |
| ·培养基的配制 | 第36页 |
| ·ELISA试验相关溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验相关溶液的配制 | 第37页 |
| ·细胞融合相关溶液的配制 | 第37-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-48页 |
| ·技术路线 | 第39页 |
| ·AFB_1完全抗原的制备与鉴定 | 第39-40页 |
| ·间接ELISA试验的建立 | 第40-41页 |
| ·方阵法确定最佳抗原包被浓度和最佳酶标二抗工作浓度的确定 | 第40页 |
| ·最佳包被时间的选择 | 第40-41页 |
| ·最佳封闭时间的选择 | 第41页 |
| ·最佳酶标二抗反应时间的选择 | 第41页 |
| ·小鼠免疫和血清效价的测定 | 第41-42页 |
| ·小鼠免疫 | 第41-42页 |
| ·小鼠血清效价的测定 | 第42页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第42-46页 |
| ·NSO小鼠骨髓瘤细胞的准备 | 第42页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第42页 |
| ·小鼠脾细胞制备 | 第42-43页 |
| ·细胞融合 | 第43页 |
| ·杂交瘤的培养 | 第43-44页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第44页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第44-45页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化 | 第45-46页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第46页 |
| ·体外培养 | 第46页 |
| ·体内诱生腹水 | 第46页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第46-48页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体的交叉反应性鉴定 | 第47页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第47-48页 |
| ·阳性杂交瘤细胞稳定性测定 | 第48页 |
| 3. 结果 | 第48-55页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第48-51页 |
| ·最佳检测抗原包被浓度和酶标二抗工作浓度 | 第48页 |
| ·最佳抗原包被时间 | 第48-49页 |
| ·最佳封闭时间 | 第49-50页 |
| ·最佳二抗作用时间 | 第50-51页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价 | 第51-52页 |
| ·融合率 | 第52页 |
| ·单克隆杂交瘤细胞株的建立 | 第52页 |
| ·腹水单克隆抗体的生产 | 第52-53页 |
| ·单抗特性的鉴定 | 第53-55页 |
| ·单克隆抗体的ELISA效价 | 第53页 |
| ·单抗的特异性鉴定 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第54页 |
| ·杂交瘤细胞的稳定性测定 | 第54-55页 |
| 4. 讨论 | 第55-59页 |
| ·AFB_1完全抗原的制备方法 | 第55-56页 |
| ·AFB_1肟(AFB_1O)的制备 | 第55页 |
| ·AFB_1肟与载体蛋白质的链接 | 第55-56页 |
| ·免疫程序 | 第56页 |
| ·饲养细胞 | 第56页 |
| ·细胞融合 | 第56-57页 |
| ·阳性克隆孔筛选 | 第57页 |
| ·杂交瘤细胞株克隆化培养和冻存 | 第57-58页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第58页 |
| ·腹水的制备 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
