| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 肌纤维类型与猪肉品质的关系 | 第14-16页 |
| ·肌纤维的分类 | 第14-15页 |
| ·肌纤维与肉质的关系 | 第15-16页 |
| ·肌纤维与肉色的关系 | 第15页 |
| ·肌纤维与pH的关系 | 第15页 |
| ·肌纤维与嫩度的关系 | 第15-16页 |
| ·肌纤维与风味的关系 | 第16页 |
| ·肌纤维与系水力的关系 | 第16页 |
| ·结语 | 第16页 |
| 2 PGC-1α与肌纤维转化 | 第16-18页 |
| ·PGC-1的结构 | 第17页 |
| ·PGC-1α在肌纤维转化中的作用 | 第17-18页 |
| 3 转基因动物技术及其在畜牧业上的应用 | 第18-23页 |
| ·实用转基因技术 | 第18-21页 |
| ·显微注射法 | 第18-19页 |
| ·体细胞核移植法 | 第19页 |
| ·胚胎干细胞法 | 第19-20页 |
| ·逆转录病毒感染法 | 第20页 |
| ·精子载体法 | 第20-21页 |
| ·转基因动物在畜牧业中的应用 | 第21-23页 |
| ·利用转基因技术改良畜禽生产性状 | 第21-22页 |
| ·利用转基因动物技术培育抗病品系 | 第22页 |
| ·利用转基因动物技术生产非常规畜牧产品 | 第22-23页 |
| 4 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 转录辅助活化因子PGC-1α表达载体的构建 | 第24-35页 |
| 实验材料 | 第24-25页 |
| 1 菌株和载体 | 第24页 |
| 2 生化与分子生物学试剂 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·工具酶与化学试剂 | 第24页 |
| ·主要溶液 | 第24-25页 |
| ·核酸电泳用试剂 | 第24页 |
| ·PCR扩增用试剂 | 第24-25页 |
| ·碱裂解法提取质粒所需试剂 | 第25页 |
| 3 主要仪器 | 第25页 |
| 实验方法 | 第25-30页 |
| 1 质粒提取 | 第25-26页 |
| ·采用碱裂解法提取小量细菌质粒DNA | 第25-26页 |
| ·质粒提取试剂盒提取 | 第26页 |
| 2 PGC-1α基因的合成 | 第26页 |
| 3 显微注射用转基因载体的构建 | 第26-30页 |
| ·pCAGGS-PGC-1α-neo转基因载体的构建 | 第26-29页 |
| ·酶切体系 | 第27页 |
| ·连接 | 第27-28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·摇菌 | 第28页 |
| ·菌液PCR | 第28-29页 |
| ·质粒提取 | 第29页 |
| ·pCAGGS-PGC-1α-neo转基因载体的鉴定 | 第29-30页 |
| 结果与分析 | 第30-33页 |
| 1 pCAGGS-PGC-1α-neo转基因载体的构建示意图 | 第30页 |
| 2 pCAGGS-PGC-1α-neo转基因载体的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 3 pCAGGS-PGC-1α-neo载体质粒DNA的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 4 pCAGGS-PGC-1α-neo转基因载体的测序结果 | 第32-33页 |
| 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章PGC-la基因在小鼠C2C12细胞中的研究 | 第35-45页 |
| 实验材料 | 第35-36页 |
| 1 质粒和细胞株 | 第35页 |
| 2 细胞培养液及试剂 | 第35页 |
| 3 生化与分子生物学试剂 | 第35页 |
| 4 主要溶液 | 第35页 |
| 5 主要仪器 | 第35-36页 |
| 实验方法 | 第36-40页 |
| 1 pCAGGS-PGC-1α-neo表达载体的提取和鉴定 | 第36-37页 |
| ·pCAGGS-PGC-1α-neo表达载体的提取 | 第36-37页 |
| ·pCAGGS-PGC-1α-neo表达载体的鉴定 | 第37页 |
| 2 细胞培养与传代 | 第37页 |
| 3 阳离子脂质体法转染小鼠C2C12细胞 | 第37-38页 |
| 4 小鼠C2C12细胞总RNA的提取 | 第38页 |
| 5 RT-PCR检测小鼠C2C12细胞中PGC-1α的转录 | 第38-40页 |
| ·引物设计 | 第38-39页 |
| ·反转录反应 | 第39页 |
| ·PCR反应 | 第39-40页 |
| ·检测转染细胞内PGC-1α的转录的反应体系及条件 | 第39-40页 |
| ·检测细胞内β-actin的转录的反应体系及条件 | 第40页 |
| 结果与分析 | 第40-42页 |
| 1 两种方案的酶切电泳图谱 | 第40-41页 |
| 2 RT-PCR检测转染细胞内PGC-1α的转录 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-45页 |
| 1 关于C2C12细胞的增殖培养 | 第42-43页 |
| 2 关于细胞转染 | 第43-44页 |
| 3 载体表达效果的初步检验 | 第44-45页 |
| 第四章 转pCAGGS-PGC-1α-neo载体小鼠模型的建立 | 第45-63页 |
| 实验材料 | 第45-46页 |
| 1 质粒与菌株 | 第45页 |
| 2 工具酶与试剂 | 第45页 |
| 3 主要溶液 | 第45-46页 |
| 4 实验动物 | 第46页 |
| 5 实验仪器 | 第46页 |
| 实验方法 | 第46-55页 |
| 1 pCAGGS-PGC-1α-neo显微注射片断的制备 | 第46-47页 |
| ·线性化酶切方案 | 第46页 |
| ·线性化酶切体系 | 第46-47页 |
| 2 显微注射制备转基因小鼠 | 第47-48页 |
| ·显微注射用小鼠的准备 | 第47页 |
| ·公鼠的输精管结扎 | 第47页 |
| ·超排卵 | 第47页 |
| ·取卵 | 第47页 |
| ·受精卵的显微注射 | 第47-48页 |
| ·受精卵的输卵管移植 | 第48页 |
| 3 小鼠鼠尾基因组DNA的制备 | 第48页 |
| 4 转基因小鼠基因型的鉴定 | 第48-49页 |
| 5 小鼠组织总RNA的提取 | 第49页 |
| 6 RT-PCR检测转基因小鼠体内PGC-1α的转录 | 第49-51页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·反转录反应 | 第49-50页 |
| ·PCR反应 | 第50-51页 |
| ·检测转基因小鼠体内PGC-1α的转录的反应体系及条件 | 第50页 |
| ·检测转基因小鼠体内β-actin的转录的反应体系及条件 | 第50-51页 |
| 7 转基因小鼠系PGC-1α的组织表达谱 | 第51页 |
| 8 在蛋白水平上检测PGC-1α转基因小鼠肌肉组织中PGC-1α的表达 | 第51-54页 |
| ·小鼠肌肉总蛋白的提取 | 第51页 |
| ·Western blot测转基因小鼠肌肉组织中PGC-1α的表达 | 第51-54页 |
| ·电泳 | 第51-53页 |
| ·电转 | 第53页 |
| ·杂交 | 第53-54页 |
| 9 肌纤维切片的制作及HE染色 | 第54-55页 |
| ·石蜡切片样本的制作 | 第54页 |
| ·石蜡切片的HE染色 | 第54-55页 |
| ·脱蜡 | 第54页 |
| ·染色 | 第54-55页 |
| 结果与分析 | 第55-59页 |
| 1 pCAGGS-PGC-1α-neo转基因载体注射片断的准备 | 第55页 |
| 2 pCAGGS-PGC-1α-neo转基因载体的显微注射 | 第55页 |
| 3 转基因小鼠的基因型鉴定 | 第55-56页 |
| 4 RT-PCR检测转基因小鼠体内PGC-1α的转录 | 第56-57页 |
| 5 转基因小鼠系PGC-1α的组织表达谱 | 第57页 |
| 6 Western blot检测转基因小鼠肌肉组织中PGC-1α的表达 | 第57-58页 |
| 7 肌肉的生态学特征 | 第58-59页 |
| 8 肌纤维组织切片的观察 | 第59页 |
| 讨论 | 第59-63页 |
| 1 关于显微注射技术 | 第59-60页 |
| 2 转基因小鼠的外源基因整合分析 | 第60-61页 |
| ·外源基因在受体基因组中整合的方式 | 第60页 |
| ·鉴定外源基因整合的方法 | 第60-61页 |
| 3 转基因小鼠的外源基因的组织表达差异分析 | 第61页 |
| 4 转基因小鼠肌纤维转化的初步分析 | 第61-62页 |
| 5 后续工作计划 | 第62-63页 |
| 第五章 小结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
